EmmaDu Posted January 13, 2021 Posted January 13, 2021 Salut, je crois que je m'embrouille un peu... Est ce que on pourrait me réexpliquer tout le mecanisme pour avoir une protéine recombinante svpp (gene interet, plasmide, clonage...) Quote
Solution virasolelh Posted January 13, 2021 Solution Posted January 13, 2021 hello @EmmaDu! une protéine recombinante c'est une protéine obtenue par génie génétique. une protéine (attention phrase très obvious), c'est la traduction d'un ARNm lui même transcrit de l'ADN, donc on va chercher à agir sur l'ADN :)) à noter que la version de l'ADN la plus facile à manipuler c'est l'ADN circulaire (des bactéries). le but va donc être d'insérer de l'ADN dans le génome. mais comment est-ce qu'on obtient cet ADN ? - soit à partir de la protéine elle même. après une rétrotranscriptase et une PCR de l'ADNc (complémentaire à l'ARNm de la protéine), - soit tu vas à la banque des plasmides, tu choisis celui que tu veux, tu l'achètes et tu utilises des endonucléases pour couper (par digestion du plasmide) le gène que tu veux! il nous reste donc à faire rentrer ce petit bout d'ADN dans le génome cible. pour cela il existe plusieurs techniques, mais cette année on parle uniquement d'un vecteur, les plasmides. on va couper (avec des enzymes de restriction encore) un plasmide à un endroit pour insérer un insert (original comme nom hein) d'une certaine taille (en pb ou kpb faut faire attention). normalement il faut le faire dans le bon sens mais bettina a dit qu'elle nous embêtait pas avec ça cette année. tu prends un tube, ton ADN plasmidique, tes plasmides cibles, tes enzymes de restrictions et autres petits trucs (sels, exonucléases, ligases) et tu mélanges. normalement les inserts vont se fixer dans les trous ouverts dans les plasmides par les endonucléases. si ces endonucléases sont "à bout franc" elles vont faire une cassure nette au niveau du site de restriction, si elles sont "à bouts collants" elles vont couper "en biais. il faut que les bouts de l'insert reconnaissent les bouts ouverts du plasmides (qui sont sur sites semi-palindromiques au fait). si ça marche pas très bien on peut améliorer le processus avec des exonucléases qui vont permettre une meilleure reconnaissance (par ex. si il a une base en trop d'un côte). les ligase relient le tout et tu as ton plasmide modifié. ensuite il va falloir faire rentrer ce plasmide dans la cellule qui contient le génome cible. attention seules les eucaryotes sont capables de produire des protéines avec des modifications post-traductionnelles on transforme des bactéries et on transfecte des eucaryotes! il y a quatre moyens : chimique, électrique, synthétique ou l'utilisation de vecteurs viraux (je détaille pas ce message est déjà assez long tout le monde dort) faut juste savoir que ça marche pas bien du tout, mais quand ça marche on peut sélectionner les cellules (sur les bactéries souvent c'est avec des résistances aux antibiotiques portés spécifiquement par le plasmide modifié). ensuite on laisse ces cellules modifiées se multiplier, ou on les clone, et tada!! elle vont ENFIN produire la protéine recombinante!! tout ça pour ça !! voilà j'espère que tu as compris, j'ai surement oublié quelque chose si un RM ou tuteur le remarque il nous le dira!! bon courage :)) Nébuleuse, EmmaDu, KimK_BIO and 4 others 1 2 1 2 1 Quote
EmmaDu Posted January 13, 2021 Author Posted January 13, 2021 Mercii bcp vraiment, tout est clair Juste est ce que les enzymes de restriction c'est les endonuclease ?? Quote
virasolelh Posted January 13, 2021 Posted January 13, 2021 Il y a 2 heures, EmmaDu a dit : restriction c'est les endonuclease ?? oui ! si c'est bon pour toi passe le sujet en résolu ;)) EmmaDu 1 Quote
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