Preparation adn pour transgenese

[EmmaDu]

Salut, pourrait on m'expliquer à quoi sert le clonage d'une séquence d'intérêt dans un vecteur d'expression  dans le cadre de preparation de l adn pour la transgenese ?

[audreyfdn]

Coucou @EmmaDu!

 

Le clonage d'une séquence d'intérêt dans un vecteur d'expression permet plusieurs choses, le clonage d'une séquence est le fait d'intégrer cette séquence dans un vecteur d'expression. 

 

Cela permet tout d'abord de choisir le promoteur de la séquence : par exemple, si un gène a un promoteur eucaryote tissus spécifique, on peut cloner ce gène dans un vecteur qui contient un promoteur eucaryote qui n'est pas tissus spécifique. Cela permet après transfection du vecteur dans un organisme eucaryote d'avoir la protéine qui sera exprimé dans toutes les cellules de tout les tissus. 

Un autre exemple, tu veux qu'une protéine normalement exprimée dans des cellules eucaryotes le soit dans une cellule procaryote, tu vas donc cloner ta séquence dans un vecteur à la suite d'un promoteur procaryote. 

 

De plus, cela permet aussi de répliquer la séquence de façon très importante, je m'explique :

lorsque tu ajoute une séquence dans un vecteur, ce vecteur peut être un plasmide. Un plasmide est un petit ADN double brin circulaire qui peut ensuite être injecté dans des bactéries. Dans ces bactéries tu peut avoir la réplication de ce plasmide de façon très importante, dans un délai de temps très court. Si tu as cloné une séquence d'intérêt dans le plasmide, tu va pouvoir avoir la réplication de ta séquence un nombre de fois très important. 

 

Ensuite, dans la diapo 61 du professeur Couderc, il y a écrit entre parenthèses : "choix de la séquence". Je pense que par ça, elle veut dire que tu peux cloner une séquence d'intérêt dans un vecteur d'expression qui va pouvoir remplacer une autre séquence.

tu as un séquence X comprise entre deux sites de restrictions dans un vecteur, tu va pouvoir remplacer cette séquence X par une séquence Y si celle ci est aussi comprise entre les deux même sites de restrictions. Voici mon interprétation de cette phrase, peut être que ce n'est pas ça dont elle parle. 

 

Tu as donc beaucoup de raisons de cloner une séquence dans un vecteur d'expression.

J'espère t'avoir un petit peu aidé, si ce n'est pas le cas, n'hésite pas à me le dire :))

Bonne journée !

 

 

 

[EmmaDu]

C'est parfait merci !