QCM type

[valouz]

Bonjour, 

Quelqu'un peut-il me dire comment on résout le QCM2 de maraîchers 2018 en recherches (je ne peux pas faire de capture d'écran ça ne marche pas donc je mets le lien S2 - Concours Maraîchers Mai 2018.pdf (tutoweb.org)). Il y a une correction sur le TAT avec un tableau mais je n'ai pas tout bien compris notamment pour calculer la taille des fragments et pour interpréter la figure 3.

Merci d'avance !   

 

[Le_Cupcake]

Coucouu @valpass3112!

Alors je vais tenter de t'expliquer du mieux que je peux à ma façon

Avant de passer à ce qui nous intéresse, je récapitule : on veut insérer l'ADNc codant pour la bêta globine dans le plasmide receveur (présent sur la figure 2). On utilise BamH1 donc on fait un clonage non orienté car on utilise une seule même enzyme.

 

Donc, on a deux cas de figure :

- sois on a le vecteur souhaité avec l'ADNc inséré dans le bon sens. Toutes les flèches des promoteurs/terminateurs/ADNc vont dans le même sens.

- sois on a le vecteur avec l'ADNc dans le mauvais sens (on a un clonage non orienté, l'insert peut se mettre dans un sens comme dans l'autre)

- sois on a un plasmide vide car il s'est refermé sur lui même. Donc c'est le même plasmide que celui sur la figure 2 vu qu'il n'y a rien dedans (enfin je veux dire pas d'ADNc )

Petit conseil : n'hésite pas à faire des petits schémas sur ton brouillon pour voir quels plasmides tu peux obtenir et de quelles tailles (tu n'est pas obligé de faire un tableau, en tout cas moi, j'avais pas fait comme ça). Voici le mien : https://zupimages.net/viewer.php?id=21/02/sm2b.jpg

Qu'est ce qu'on remarque après avoir fait nos trois plasmides ?

1.  Il est facile de reconnaître un plasmide qui a intégré ou non l'ADNc, on aura seulement un unique fragment de 4500 pb car on a qu'un seul site de restriction pour les 3 enzymes.
2. Pour les 2 autres cas de figure ça se complique. On ne peut pas savoir dans quel sens a été inséré l'ADNc avec Bam H1 car c'est avec cette enzyme qu'on a isolé et inséré l'ADNc dans le plasmide. Pour EcoR1 y a un petit piège. Comme tu as pu le remarquer, on obtient 2 fragments qui ont la même taille pour chacun de ces plasmides, un de 520 pb et un de 4950. En fait, le deuxième site de restriction de cette enzyme se trouve AU MILIEU de l'ADNc de la béta globine. Donc dans TOUT les cas, si on a un site de restriction au milieu d'un ADNc, on ne pourra jamais déterminer le sens d'insertion de notre gène d'intérêt !

Si tu as besoin de plus de détail pour les calculs de tailles des fragments n'hésite pas à me le dire.

Donc maintenant on va pouvoir attaquer le fameux tableau de la figure 3 (je fais exprès de bien bien détailler l'exercice et la démarche à suivre parce qu'ils sont très importants à comprendre, Bettina adoooore ce genre de QCM ^^). Avec tout ce que je viens de faire, on a mâché le travail !

On a en haut le numéro des clones, à droite les marqueurs de taille.

• Plasmide 1 : Coupure par Eco R1 -> 2 fragments d'environ 500 et 5000 pb. Coupure par BamH1 -> 2 fragments de 4500 et 1000 pb. Coupure par Hind 3 -> 2 fragments d'environ 5300 et 200 pb. Ici on est en présence d'un plasmide dont l'ADNc a été inséré dans le BON sens
• Plasmide 2 : Idem, même configuration que le plasmide 1 -> ADNc dans le bon sens
• Plasmide 3 : Que l'on coupe par EcoR1, BamH1 ou Hind 3, on a un unique fragment de 4500 pb -> plasmide vide
• Plasmide 4 : Coupure par Eco R1 -> 2 fragments d'environ 500 et 5000 pb. Coupure par BamH1 -> 2 fragments de 4500 et 1000 pb. Coupure par Hind 3 -> 2 fragments d'environ 4700 et 800 pb. Grâce à Hind3, on sait que ce plasmide contient l'ADNc dans le mauvais sens

ET VOI-LA ! Après, répondre au QCM est un jeu d'enfant

A) Vrai -> si on a pas d'ADNc, on aura un unique fragment de 4500 pb. Si on a l'ADNc, on aura 2 fragments de 4500 + 1000 pb de l'ADNc

B) Faux -> comme je l'ai dit auparavant, si le site de restrinction est au milieu de notre ADNc, on aura la même taille de fragment que l'ADNc soit bien orienté ou non. C'est le cas pour EcoR1 donc c'est faux

C) Vrai -> Alors pour le coup, la correction est fausse ^^ Le plasmide 4 a l'ADNc dans le mauvais sens ! Quand notre enzyme de transcription voudra agir, elle va suivre le promoteur et pourra quand même transcrire son ARNm. Cependant l'ARNm sera mal foutu car l'ADNc était à l'envers et ne donnera pas de protéine ! Il faut bien lire les items !

D) Vrai -> Notre plasmide 2 est correct, il a l'ADNc dans le bon sens. Donc les cellules pourront transcrire et traduire la protéine d'intérêt (ce qu'on aurait pas pu voir avec notre plasmide 4). Deux petites choses à vérifier cependant : que notre promoteur est bien eucaryote et que le terme utilisé est bien "transfecté" (transformer étant relatif aux procaryotes).

E) Faux -> On nous spécifie bien que la Bêta globuline est cytosolique. Elle n'est donc pas excrétée et ne sera pas retrouvée dans le milieu extra-cellulaire.

 

Bon ne t'inquiète pas, même si ce QCM parait difficile, on va de plus en plus vite avec l'habitude.

N'hésite pas si il te reste des incompréhension

 

[valouz]

@Le_Cupcake merci beaucoup beaucoup, c'est super clair maintenant !! 

Encore mercii !!!!