clem_31 Posted January 10, 2021 Posted January 10, 2021 (edited) Sltt, j'ai aussi d'autres questions sorry.... - https://zupimages.net/viewer.php?id=21/01/sfd6.png Pour ce QCM (maraichers 2020) comment faire pour identifier quel enzyme permet de déterminer la taille du plasmide, le promoteur, le sens d'insertion Mais il me semble que les sens d'insertion orientée et non orientée ne sont plus à notre programme..... - https://zupimages.net/viewer.php?id=21/01/soon.png C. Faux car 5500. Mais je pensais qu’il fallait aussi soustraire 820 de BamH1 sur la figure2... Merciiii beaucoup Edited January 10, 2021 by clem_31 Quote
Ancien Responsable Matière Solution Le_Cupcake Posted January 10, 2021 Ancien Responsable Matière Solution Posted January 10, 2021 Helloooo @clem_31 ! Pour ta première question, il faut déjà bien comprendre l'exercice (un peu compliqué par rapport à ce que fait Bettina d'habitude) : On a deux plasmides. D'après l'énoncé, on veut le premier plasmide avec le promoteur procaryote du second. Donc on obtient à peu près ça (schéma très simplifié) : https://zupimages.net/viewer.php?id=21/01/4e4y.jpg Concernant le QCM 2 : - Pour l'item B, toutes les enzymes permettent de connaitre la taille du plasmide si elles y sont dessus. Ici on voulait voir si tu avais utilisé le bon plasmide car on t'en présentait 2 dans l'exo. Donc l'item est vrai. - Item C : on s'est servi de HindIII pour enlever le promoteur et en insérer un nouveau. Si on recoupe avec hindIII ça ne servira à rien on ne saura pas quel promoteur a été inséré -> Faux. Edit : L'item est vrai !! Même si on a utilisé hindIII pour insérer le nouveau promoteur, elle peut quand même nous permettre de savoir si le bon promoteur a été inséré. En effet, si on coupe par hindIII un plasmide contenant le promoteur eucaryote (donc c'est le mauvais plasmide), on aura 2 fragments de 490 pb et de 5010 pb. Si il contient le promoteur procaryote (bon plasmide), on aura deux fragments de 800 pb et de 5010 pb. Si le plasmide est vide, il y aura un unique fragment de 5010 pb car le plasmide se sera refermé sur lui même. Mais attention, HindIII ne nous permettra pas de déterminer le SENS du promoteur d'intérêt. - Item D : Tu dois quand même le connaitre les clonages orientés/non orientés, ce qu'il ne faut pas apprendre, c'est les coupages à bout collants/bout francs et tout ces détails sur les enzymes isocaudamères. Tu vas voir c'est tout simple ! Si tu utilise une même enzyme pour couper ton plasmide et y insérer l'ADNc, c'est une insertion non orientée car ton plasmide peut se mettre dans le bon sens ou à l'envers. Si tu en utilise deux, c'est un clonage orienté parce que tu "orientes" ton ADNc dans le bon sens. Ici c'est un clonage non orienté car on utilise seulement hindIII. La différence ici, avec ce que fait Bettina habituellement, c'est que le clonage concerne un promoteur et non un ADNc. Comme c'est un clonage non orienté, on ne peut pas connaitre le sens d'orientation car HindIII permet l'insertion du promoteur dans les 2 sens ! Il nous faudrait une enzyme qui coupe au milieu du promoteur. Edit : Il nous faudrait une enzyme qui coupe le promoteur mais SURTOUT PAS au milieu hein ! - Item E : Et non, pts1 ne nous servira à rien ! Là y a un petit piège bien sournois. Pts 1 est présent au MILIEU du promoteur (à 400 pb de chaque extrémité) ! Donc qu'il soit au dans le bon ou le mauvais sens ne fera aucune différence à la taille des fragments. Dans n'importe quel sens on aura deux fragments de 410 et de 5 400. Si l'enzyme avait été n'importe où ailleurs sur le promoteur, l'item aurait été vrai ! Est ce que c'est ok pour ce qcm ? Pour ta deuxième question, j'imagine qu'on utilise BamH1 (clonage non orienté) et qu'on insère l'ADNc de la beta globine sur pRH. Donc tu fait 4500 + (4600 - 3600) = 5500. On ouvre juste le plasmide en le coupant à l'aide de BamH1 et on y insère les 1000 pb de notre ADNc. Tu n'as rien à soustraire de plus, tu garde ce qu'il y a avant BamH1. Dis moi si c'est pas clair ou si tu veux que je réexplique Paul__onium, TariqMUJEEB and Squee 3 Quote
DrFail Posted January 10, 2021 Posted January 10, 2021 hello, je me permets de m'incruster (sorry) Il y a 2 heures, Le_Cupcake a dit : Item C : on s'est servi de HindIII pour enlever le promoteur et en insérer un nouveau. Si on recoupe avec hindIII ça ne servira à rien on ne saura pas quel promoteur a été inséré -> Faux j'avais raisonné comme toi mais l'item est juste sur la correction de la feuille de coche, du coup est ce qu'il fallait raisonner sur pProm avant d'obtenir le vecteur recombinant et ainsi voir qu'il permet d'identifier le promoteur proca présent sur pProm? Et aussi autre petite question (par rapport à l'item D) Il y a 2 heures, Le_Cupcake a dit : Il nous faudrait une enzyme qui coupe au milieu du promoteur. et item E Il y a 2 heures, Le_Cupcake a dit : Si l'enzyme avait été n'importe où ailleurs sur le promoteur, l'item aurait été vrai ! Je ne comprends pas ici je trouve que ça se contredit Pour l'item C je suis d'accord que ça ne permet pas d'évaluer le sens puisque c'est la même enzyme mais du coup pour savoir le sens d'insertion, on aurait bien pu utiliser Pst1 mais il fallait qu'il soit en dehors du promoteur, c'est bien ça? merci Quote
Ancien Responsable Matière Le_Cupcake Posted January 10, 2021 Ancien Responsable Matière Posted January 10, 2021 Coucou @DrFail !! il y a 50 minutes, DrFail a dit : j'avais raisonné comme toi mais l'item est juste sur la correction de la feuille de coche, du coup est ce qu'il fallait raisonner sur pProm avant d'obtenir le vecteur recombinant et ainsi voir qu'il permet d'identifier le promoteur proca présent sur pProm? Wooow j'ai dis une très grosse bêtise merci de me l'avoir fait remarqué ! Alors non, on ne raisonne que sur le plasmide pCOV-PRO. L'item est bien vrai car si on coupe par hindIII un plasmide contenant le promoteur eucaryote, on aura 2 fragments de 490 pb et de 5010 pb. Si il contient le promoteur procaryote, on aura deux fragments de 800 pb et de 5010 pb. Si le plasmide est vide, il y aura un unique fragment de 5010 pb car le plasmide se sera refermé sur lui même. Donc finalement, on s'en fiche de se servir de la même enzyme que celle utilisée pour extraire le promoteur ! On utilise le marqueur de taille des fragments sur le gel et le tour est joué ! il y a 50 minutes, DrFail a dit : Je ne comprends pas ici je trouve que ça se contredit Pour l'item C je suis d'accord que ça ne permet pas d'évaluer le sens puisque c'est la même enzyme mais du coup pour savoir le sens d'insertion, on aurait bien pu utiliser Pst1 mais il fallait qu'il soit en dehors du promoteur, c'est bien ça? Aïe ! Je me suis emmêlée les pinceaux ahah ! Alors ce que je voulais dire, c'est qu'on aura besoin d'un site de restriction sur le plasmide ailleurs que sur le promoteur + un site de restriction sur le promoteur mais SURTOUT PAS au milieu sinon impossible de savoir dans quel sens il est. Si on a deux sites en dehors du promoteur, on ne pourra pas non plus savoir si il est dans le bon sens, car on aura la même taille au niveau des fragments. Donc pour voir si le promoteur est dans le bon sens, il faut impérativement avoir un site sur le promoteur (mais encore une fois pas au milieu sinon on aura les mêmes tailles de fragments). Est ce que tu comprends mieux ? Dsl pour toutes ces imprécisions ! Je modifie tout de suite ça ! Squee 1 Quote
DrFail Posted January 10, 2021 Posted January 10, 2021 Mercii bcp @Le_Cupcake!! C'est très bien expliqué oui ! Le_Cupcake 1 Quote
clem_31 Posted January 11, 2021 Author Posted January 11, 2021 Merci bcp, c'est super clair !!!!!! @Le_Cupcake Le_Cupcake 1 Quote
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