Spé pharma PASS ( ou ancien cours recherche ) protéines recombiantes

[yasminawsf]

Salut tout le monde,

J'avais quelques questions sur l'introduction de ce cours.. si on peut m'aider, ça serait trop cool !

 

• Je voulais savoir si pour arriver à la création de protéines recombinantes on procédait par transfert de gènes ou alors par thérapie génique ? De même pour la création d'un vecteur à partir d'un virus, on fait de la thérapie génique pour encrer la portion d'ADN ( ou ARN ) dedans ?

C'est assez ambiguë dans ma tête. Elle avait expliqué que la différence entre ces deux méthodes était que pour la première on amener un exogène qui s'exprimait sans s'intégrer et que pour la deuxième il y avait une addition au génome je crois ou alors on recombinait fin bon on touchait directement le matériel génétique je crois..

• Concernant la thérapie cellulaire je voulais savoir si il y avait une thérapie génique en amont ?

 

Voilà merci beaucoup, si ça se troue j'ai juste mal compris la subtilité entre ceux deux choses et c'est pour ça que j'arrive pas à discerner moi même mais merciii

 

Pour aider si jamais, c'est surtout sur les diapo 14 et 15 du cours que ça prête à confusion ( pour ma part ) encore merci et bonne année

[Sarhabdomyocyte]

Coucou !!

 

il y a une heure, yasminawsf a dit :

C'est assez ambiguë dans ma tête. Elle avait expliqué que la différence entre ces deux méthodes était que pour la première on amener un exogène qui s'exprimait sans s'intégrer et que pour la deuxième il y avait une addition au génome je crois ou alors on recombinait fin bon on touchait directement le matériel génétique je crois..

 

Effectivement c’est un peu ça.

 

Dans le cas de la production d’une protéine recombinante, le gène d’intérêt est introduit dans une séquence d’ADN déjà existante dans une cellule in vitro (on prend alors des bactéries par exemple, qui ont de l’ADN circulaire : il faudra alors couper cet ADN en un point pour y insérer le gène, c’est beaucoup plus simple qu’avec de l’ADN linéaire). Ce chromosome circulaire est alors appelé vecteur. Le but de ce vecteur est de cloner la protéine d’intérêt, qui sera produite in vitro.

Par exemple, les diabétiques ont besoin d’injections d’insuline, et cette insuline est produite par insertion du gène codant pour l’insuline dans un vecteur bactérien puis clonage (car l’ADN s’exprime). On récolte et purifie ensuite cette insuline produite en masse pour les donner aux malades.

 

Dans le cas d’une thérapie génique, tu vas introduire un matériel génétique nouveau directement chez les cellules de l’individu à soigner. Cet ADN « vivra » grâce à la machinerie de réplication et d’expression de la cellule hôte. Il est introduit via un vecteur viral (le plus souvent), qui (un peu comme le COVID hihi) fusionne avec la cellule hôte et y déverse son matériel génétique. C’est la particularité d’un virus : son matériel génétique s’inclut à celui de l’hôte, et produit des protéines en squattant la machinerie d’expression et ces protéines seront sécrétées à visée d’autres cellules puis converties en ADNc par une ADN pol ARN dépendante (codée par le virus lui-même), qui lui même s’intègrera au génome de la cellule infectée etc. 

Ainsi, par génie génétique, on va introduire l’insert (gène à transfecter chez l’homme) dans un virus, et on va volontairement contaminer le patient par ce virus (inoffensif, t’inquiète).

Par exemple, dans certains lymphomes (cancers du sang), on prélève des lymphocytes T au patient et on y injecte un gène codant pour un récepteur appelé « CAR-T » (qui reconnaît les cellules cancéreuses, qui seront donc détruites par le système immunitaire) grâce à un vecteur. Ces cellules ont ainsi gagné une fonction, on les appelle CAR-T cells.

 

 

La thérapie cellulaire est un concept plus large, elle peut avoir recours ou non à la thérapie génique. Par exemple, elle peut consister à « juste » injecter des cellules souches hématopoïétiques dans la moelle osseuse, dans un cas d’aplasie médullaire (ces cellules n’ont donc pas besoin d’être modifiées génétiquement). Mais il est aussi possible de modifier les cellules à injecter, on rejoint l’exemple des CAR-T cells plus haut qui est donc un exemple à la fois de thérapie génique et de thérapie cellulaire.

 

 

J’espère que je ne suis pas passée à côté de ta question, n’hésite pas à me dire si ce n’est toujours pas clair.

 

Bon courage ma belle  

[yasminawsf]

Il y a 6 heures, Sarhabdomyocyte a dit :

Dans le cas d’une thérapie génique, tu vas introduire un matériel génétique nouveau directement chez les cellules de l’individu à soigner. Cet ADN « vivra » grâce à la machinerie de réplication et d’expression de la cellule hôte.

D’accord !! Donc si j’ai bien compris les cellules qui subissent une modification sont des les cellules qui font l’objet de soin. On va modifier/cibler directement ces cellules-ci. 

 

 

Il y a 6 heures, Sarhabdomyocyte a dit :

Dans le cas de la production d’une protéine recombinante, le gène d’intérêt est introduit dans une séquence d’ADN déjà existante dans une cellule in vitro (on prend alors des bactéries par exemple, qui ont de l’ADN circulaire : il faudra alors couper cet ADN en un point pour y insérer le gène, c’est beaucoup plus simple qu’avec de l’ADN linéaire).

Oui ça j’avais bien compris l’étape de la sélection d’une séquence avec la cassette promoteur + ADN + terminateur et ensuite l’insertion dans un vecteur ( plasmide ) etc. Mais justement je me demandais enfaite le statut de notre action quand on introduit l’adn recombinant dans une cellule productive de ces protéines thérapeutiques. J’hesisais entre transfert de gènes et thérapie génique jusqu’a que je comprenne que c’était ni l’un ni l’autre. Mais qu’enfaite cette cellule était un OGM et qu’on effectuais une transgénèse c’est bien ca ? 

Il y a 6 heures, Sarhabdomyocyte a dit :

La thérapie cellulaire est un concept plus large, elle peut avoir recours ou non à la thérapie génique

 

Merci je comprend mieux, enfaite je peut donc parler de thérapie cellulaire dès qu’on injecte des cellules eucalyptus pour soigner un organisme vivant comme l’Homme,  c’est ça ? 

Je comprend beaucoup mieux grâce à toi je t’en remercie beaucoup petit rhabdomyocyte hihi

[yasminawsf]

Il y a 7 heures, Sarhabdomyocyte a dit :

est introduit via un vecteur viral (le plus souvent), qui (un peu comme le COVID hihi) fusionne avec la cellule hôte et y déverse son matériel génétiqu

D’accord donc quand c’est délivré par un plasmide, il n’y a pas de fusion ? 

voila c’est ma dernière question merci encore mile fois 

[Sarhabdomyocyte]

il y a 20 minutes, yasminawsf a dit :

D’accord !! Donc si j’ai bien compris les cellules qui subissent une modification sont des les cellules qui font l’objet de soin. On va modifier/cibler directement ces cellules-ci. 

En théorie oui, après étant donné que le virus se multiplie et colonise les cellules environnantes, si on veut viser un tissu particulier on utilisera un promoteur tissu-spécifique placé dans le vecteur avant le gène d'intérêt.

 

il y a 20 minutes, yasminawsf a dit :

J’hesisais entre transfert de gènes et thérapie génique jusqu’a que je comprenne que c’était ni l’un ni l’autre. Mais qu’enfaite cette cellule était un OGM et qu’on effectuais une transgénèse c’est bien ca ? 

Effectivement ce n'est ni l'un ni l'autre. La bactérie in vitro est seulement une "usine" à produire la protéine d'intérêt qui sera ensuite purifiée.

Oui je pense qu'on peut appeler la bactérie un OGM, ça correspond à la définition, et elle est génétiquement modifiée car on y a introduit un transgène via un vecteur, donc oui on peut parler de transgénèse. Mais attention la transgénèse se rapporte à cette bactérie productrice, et pas à la technique de soin en elle-même (pour reprendre l'exemple de l'insuline, les cellules du patient ne sont pas modifiées génétiquement, on a effectué une transgénèse dans les bactéries productrices d'insuline mais pas dans le patient !)

 

il y a 6 minutes, yasminawsf a dit :

quand c’est délivré par un plasmide, il n’y a pas de fusion ? 

Effectivement, car le plasmide a justement la capacité de se déplacer de bactérie en bactérie (c'est pourquoi chez les bactéries il y a aussi des formes de transmission génétique horizontale, et pas que verticale).

Mais je ne crois pas que ce soit utilisé en thérapie, ce sont des gènes circulaires bactériens...

 

 

smiley coeur

 

 

il y a 20 minutes, yasminawsf a dit :

Merci je comprend mieux, enfaite je peut donc parler de thérapie cellulaire dès qu’on injecte des cellules eucalyptus pour soigner un organisme vivant comme l’Homme,  c’est ça ? 

Je comprend beaucoup mieux grâce à toi je t’en remercie beaucoup petit rhabdomyocyte hihi

c'est exactement ça !!

waaaaa je suis un petit rhabdomyocyte sauvage j'adore

[yasminawsf]

Le 06/01/2021 à 20:22, Sarhabdomyocyte a dit :

En théorie oui, après étant donné que le virus se multiplie et colonise les cellules environnantes, si on veut viser un tissu particulier on utilisera un promoteur tissu-spécifique placé dans le vecteur avant le gène d'intérêt.

 

Effectivement ce n'est ni l'un ni l'autre. La bactérie in vitro est seulement une "usine" à produire la protéine d'intérêt qui sera ensuite purifiée.

Oui je pense qu'on peut appeler la bactérie un OGM, ça correspond à la définition, et elle est génétiquement modifiée car on y a introduit un transgène via un vecteur, donc oui on peut parler de transgénèse. Mais attention la transgénèse se rapporte à cette bactérie productrice, et pas à la technique de soin en elle-même (pour reprendre l'exemple de l'insuline, les cellules du patient ne sont pas modifiées génétiquement, on a effectué une transgénèse dans les bactéries productrices d'insuline mais pas dans le patient !)

 

Effectivement, car le plasmide a justement la capacité de se déplacer de bactérie en bactérie (c'est pourquoi chez les bactéries il y a aussi des formes de transmission génétique horizontale, et pas que verticale).

Mais je ne crois pas que ce soit utilisé en thérapie, ce sont des gènes circulaires bactériens...

 

 

smiley coeur

 

 

c'est exactement ça !!

waaaaa je suis un petit rhabdomyocyte sauvage j'adore

Merci beaucoup j'ai tout compris grâce à toi je te souhaite pleins d'amour et de réussite (désolé de répondre aussi tard je voyais pas la notif ! )coeur coeur