Cloner plasmide

[lea2002]

salut , y'a un truc que je ne comprends pas dans le cours , en gros une fois qu'on reinjecter le plasmide dans la bactérie , et qu'on le met dans la gellose , elle nous a dit qu'il fallait bien faire attention à utiliser la kenamicine et non la puromycine , car on avait un promoteur procaryote , mais je comprends pas pourquoi ici on s'intéresse au promoteur procaryote alors que jusqu'alors il fallait regarder l'eucaryote , et ducoup comment svaoir à l'examen si il faut utiliser le promoteur procaryote ou eucaryote ? 

merci bcpp

 

 

 

[Croziflette_Claquette]

il y a 41 minutes, lea2002 a dit :

salut , y'a un truc que je ne comprends pas dans le cours , en gros une fois qu'on reinjecter le plasmide dans la bactérie , et qu'on le met dans la gellose , elle nous a dit qu'il fallait bien faire attention à utiliser la kenamicine et non la puromycine , car on avait un promoteur procaryote , mais je comprends pas pourquoi ici on s'intéresse au promoteur procaryote alors que jusqu'alors il fallait regarder l'eucaryote , et ducoup comment svaoir à l'examen si il faut utiliser le promoteur procaryote ou eucaryote ? 

merci bcpp

 

 

 

Salut!

Tout dépends dans quel organisme tu as inséré le plasmide. Tu peux dans un premier temps l'insérer dans une bactérie pour le répliquer et en avoir en grande quantité : alors pour sélectionner les bacteries qui ont bien intégrées le plasmide tu vas les sélectionner a l'aide d'un antibiotique sous la dépendance d'un promoteur procaryote puisque la bacterie n'exprimera la résistance a l'antibiotique que si devant le gene y a un promoteur procaryote.

 

Ensuite par exemple tu vas pouvoir récupérer les plasmides dupliqués pour enfin les mettre dans une cellule eucaryote (humaine ou souris par exemple) et enfin faire exprimer la protéine voulu. De la même manière, pour savoir les cellules qui auront intégrés le plasmide, on va pouvoir mettre un antibiotique et seules les cellules qui expriment la résistance à l'antibiotique avec le promoteur eucaryote seront selectionnées.

 

En bref, quand on veut savoir si le plasmide est intégré dans une cellule procaryote on met un antibiotique dont le gene de résistance est sous la dépendance d'un promoteur procaryote et quand on veut savoir si le plasmide est intégré dans une cellule eucaryote on met un antibiotique dont le gêne de résistance est sous la dépendance d'un promoteur eucaryote.

Est-ce que ca t'aide un peu ? 

[lea2002]

ok bcp plus claire donc je regarde dans quel organsime est inseré le plasmide pour qu'il se réplique merci bcpp !!!!