Insert et plasmide avec promoteur

[FowlMax]

Bonjour,

 

Me revoilà avec une question sur les inserts, visiblement je n'avais pas tout à fait compris ! 

 

J'ai joins le QCM qui me pose problème.

 

Les réponses sont BCD.

 

"C. On peut utiliser les enzymes Pae1 et Nla3 sur le plasmide puis Pae1 et Acc651 sur l'insert pour l'insérer dans le plasmide"

 

Je ne comprend pas pourquoi la C est juste. Si je coupe le plasmide avec Pae1 et Nla3, je vais donc avoir comme extrémités : CATG et CATG n'est ce pas ?

Si je découpe l'insert avec Pae1 et Acc651, j'aurais donc CATG et GTAC c'est ça ?

Or ça ne colle pas, je ne vois pas comment il peut s'insérer ?

 

J'ai une autre question à ce propos.

 

Si on découpe le plasmide avec Pae1 et Nla3, et l'insert avec Pae1 (ou Nco1 par exemple) et Fat1, on est d'accord que du coup l'insert va s'insérer "à l'envers", présentant son codon STOP du côté du promoteur 1, du coup ça ne fonctionne pas, ou je n'ai rien compris ?   

 

Merci d'avance, j'ai vraiment du mal à saisir le concept, le cours mettant d'avantage l'accent sur le pourquoi, plutôt que sur le comment, mon esprit n'arrive pas à suivre la logique derrière ça !

 

EDIT : Je rajoute une petite question subsidiaire. Vis à vis de la transgenèse, lors que l'on "crée" une chimère, ce n'est pas obligatoire qu'elle comporte les deux gènes  dans des cellules différentes ? Car le QCM T4 page 21 du poly entend que l'on peut avoir 3 possibilités selon les génomes qui participent à la formation des gonades.

Du coup, deuxième question, est-possible d'obtenir une souris homozygote après croisement de deux souris chimères (ne possèdent qu'un seul des deux génomes, et les deux le même), ou doit-on obligatoirement passer par une étape de souris hétérozygotes (par croisement chimérique) puis homozygotes (par croisement hétérozygote) ?

Je ne sais pas si c'est tout à fait clair cependant.

[sophielamo]

Pour ta 1ère interrogation il s'agit en effet d'une erreur non corrigée dans le polycopié (du TAT je présume ?? Il me semble que je l'avais remarqué l'année dernière)

 

Pour ta deuxième question, oui ça ne "fonctionne pas" mais on ne te le demandera jamais de cette façon mais on te demandera souvent s'il s'insère dans 1seul ou dans les 2sens. Mais oui, il faut que l'insert soit dans le bon sens (c'est pour ça qu'on utilise des extrémités différentes la plupart du temps.