RT-PCR et PCR

[estelleqtrd]

Bonjour, je me demandais juste par rapport à la PCR qui utilise le gel d'électrophorèse, et la RT-PCR qui elle utilise la fluorescence si toute les 2 permettaient de quantifier de 'ADN ou une s'occuper de l'ADN et l'autre de l'ARN ?  

[Donzeau_1er_du_nom]

Bonjour !

Pour faire simple : 

- PCR permet de répliquer un grand nombre de fois un fragment d'ADN.

- RT-PCR utilise les mêmes mécanismes que la PCR classique mais avec une étape de reverse transcription avant pour multiplier les fragments ARN.

- qPCR est la seule qui permette de quantifier ta technique de PCR car elle utilise un fluorescent qui ne fluorescera uniquement lorsqu'il sera intercalé dans tes brins d'ADN.

- L'utilisation du gel d'électrophorèse après ta PCR te permet d'avoir la taille de tes brins d'ADN nouvellement produits.

 

Il faut comprendre aussi que tu peux adapter chaque variantes de cette technique. Par exemple si tu veux comparer le nombre de copie d'ARNm d'un malade par rapport à un patient dans le cas d'un surexpression à cause d'une maladie génétique, tu feras une qRT-PCR car tu as de l'ARN et tu veux connaitre sa quantité. Donc pour les étapes : 
Reverse Transcrition puis PCR classique avec ajout de SYBRgreen (fluorescent) et puis tu peux finir avec une électrophorèse pour vérifier que ta technique a bien fonctionné en regarder les poids moléculaires. 

 

Voila j'espère que ca t'auras un minimum aidé à comprendre !

 

Bon courage 
 

Edited December 7, 2020 by Donzeau_1er_du_nom

[estelleqtrd]

D'accord merci beaucoup !