genome

[Oogway]

Coucou! est ce que qlq aurait le courage de m'expliquer cet exo? pcq j'ai vraiment rien compris...

https://goopics.net/i/jVPlj

Merci!!

[adrénalex]

Salut

Dans ce QCM on fait une RT-PCR, on part d'ARN extrait de foie ou de moelle, celui ci va subir une transcription inverse pour obtenir un ADNc qui sera amplifier. Sauf que les amorces dont on se sert pour faire cette amplification s'hybride sur l'exon 1 et l'exon 5. Si l'ARN n'a pas subi d'épissage alternatif, il sera constitué des 5 exons et fera donc de 1400 pb (200+300+100+400+400).

 

A: Il est possible d'avoir des fragments de moindre intensité sur le gel électrophorèse qui traduisent des amplifications parasites, elles apparaissent quand le manipulateur n'a pas été rigoureux, l'hybridation des amorces manquent de spécificité donc elles amplifient d'autres fragments que celui étudié mais de façon moindre.  

B: Si l'exon 1 a été épissé la première amorce ne pourra plus s'hybrider donc on aura pas d'amplification du fragment même pas a 1200 pb.

C : C'est la version VRAI de l'item B du coup! Tu sais que le fragment sans épissage alternatif est de 1400 pb (200+300+100+400+400). Si on obtient un fragment a 1100 pb c'est que l'exon 2 a été épissé (1400-300) donc on a bien un épissage alternatif.  L'absence de fragment peut être du soit à un épissage alternatif qui a enlevé soit l'exon 1 ou l'exon 5 par exemple, une des amorces ne peut pas se fixer et donc il n'y a pas d'amplification. 

D : En effet si il n'y a pas d'ARN au départ, pas d'ADNc qui sera reverse transcrit et donc pas d'amplification donc aucune bande visible sur le gel.

E: Je n'étais pas sûre pour cet item. Mais en regardant sur d'autres sujets sur le forum j'ai trouvé que en amplifiant une séquence se trouvant à l'intérieur du couple d'amorce initial avec un autre couple d'amorce, on va spécifier un peu plus le produit. On fait ça quand on a des amplification parasites par exemple, c'est ce qu'on appelle la PCR nichée (pas certaine que vous l'ayez vu cette année)

 

J'espère que tu as compris maintenant, si tu as d'autres questions n'hésite pas! 

[Oogway]

@adrénalexc'est tellement clair c'est fou, ca parait presque simple maintenant esperons que j'arrive a refaire ce raisonnement seule avec un contexte différent... merci infiniment ♥♥