encore td...

[Echo-ho-ho]

re-coucou, je ne comprend pas bien ces items, qqun pourrait-il m'expliquer svp?

 

A propos de l’observation de macromolécules :

D.En microscopie confocale on peut observer le mouvement de macromolécules marquées par des anticorps fluorescents dans des cellules vivantes.

--> Faux -->

Microcinéma , microscope confocal : visualisation en temps réel de la polymérisation / dépolymérisation des microtubules.

Cellules transfectées avec une construction tubuline-GFP

 

A propos de l’observation de macromolécules :

E.La transfection d’une cellule avec deux vecteurs contenant deux ADNc codant pour des protéines différentes en fusion avec la GFP pourrait permettre de montrer que ces protéines interagissent in vivo.

--> Faux -->

 

Interaction entre deux protéines (X et Y) è construction de deux vecteurs permettant d’obtenir deux molécules chimères :
X-GFP et Y-RFP par exemple

 

 

Merci d'avance

 

Edited February 26, 2021 by Echo

[Baizhu]

coucou !! 

alors pour l'item D je ne vois pas vraiment comment justifier, je ne préfère donc pas te dire de bêtises;

pour l'item E, l'item est faux car les deux protéines que tu étudies doivent être couplées à des fluorochromes de couleurs différentes et donc de fréquence d'émission différentes. La fréquence d'émission du fluorochrome de la première protéine (ici, le vert) correspond à la fréquence d'excitation du deuxième (le rouge), ce qui fait que le couplage des deux émissions te donnera une fluorescence proche du jaune (vert+rouge) ce qui te permettra de déduire que les deux protéines interagissent bien ensembles. Si les deux avaient été couplées à la GFP (qui fluoresce en vert), tu n'aurais pas pu déduire si la fluorescence est due à l'activité de la première protéine, à celle de la deuxième ou à celle des deux.

 

j'espère que j'ai été assez claire, n'hésite pas à me le dire sinon j'essaierai de te réexpliquer !

[Echo-ho-ho]

@uwu merci! oui c'est plus clair pour celle-là!

[Sarhabdomyocyte]

Coucouuu

 

 

Il y a 3 heures, Echnoel a dit :

A propos de l’observation de macromolécules :

D.En microscopie confocale on peut observer le mouvement de macromolécules marquées par des anticorps fluorescents dans des cellules vivantes.

--> Faux -->

Microcinéma , microscope confocal : visualisation en temps réel de la polymérisation / dépolymérisation des microtubules.

Cellules transfectées avec une construction tubuline-GFP

 

C'est faux parce qu'on observe les mouvements des macromolécules grâce à la transfection d'un vecteur GFP, et pas à l'aide d'anticorps. En fait, on va introduire in vitro la séquence génique codant pour GFP directement dans le chromosome contenant le gène de la tubuline, de façon à ce que la séquence GFP soit placée juste à côté de la séquence tubuline. La protéine traduite sera alors une protéine chimère (combinée) : une tubuline fluorescente !!

C'est grâce donc à cette fluorescence de la tubuline elle même qu'on va pouvoir observer les mouvements des microtubules au confocal.

Je te renvoie à la page 19 du TD qui explique tout ça.

 

 

ATTENTION PIEGE CLASSIQUE ++++++ : GENRE VRAIMENT CA TOMBE QUASI TOUT LE TEMPS +++++++ :

Il n'est pas possible d'observer des mécanismes intracellulaires à l'aide d'anticorps dans les cellules vivantes !!! L'anticorps ne peut pas rentrer dans la cellule !!!

 

Donc ATTENTION TON RADAR DOIT ÊTRE ACTIVE dès qu'on met "anticorps" et "cellule" dans le même item. C'est IMPOSSIBLE d'observer quoi que ce soit par des anticorps au sein d'une cellule vivante.

 

 

 

Courage Echo, c'est la dernière ligne droite, tu en es capable, nous on est là  

[Echo-ho-ho]

Il y a 1 heure, Sarhabdomyocyte a dit :

Coucouuu

 

 

 

C'est faux parce qu'on observe les mouvements des macromolécules grâce à la transfection d'un vecteur GFP, et pas à l'aide d'anticorps. En fait, on va introduire in vitro la séquence génique codant pour GFP directement dans le chromosome contenant le gène de la tubuline, de façon à ce que la séquence GFP soit placée juste à côté de la séquence tubuline. La protéine traduite sera alors une protéine chimère (combinée) : une tubuline fluorescente !!

C'est grâce donc à cette fluorescence de la tubuline elle même qu'on va pouvoir observer les mouvements des microtubules au confocal.

Je te renvoie à la page 19 du TD qui explique tout ça.

 

 

ATTENTION PIEGE CLASSIQUE ++++++ : GENRE VRAIMENT CA TOMBE QUASI TOUT LE TEMPS +++++++ :

Il n'est pas possible d'observer des mécanismes intracellulaires à l'aide d'anticorps dans les cellules vivantes !!! L'anticorps ne peut pas rentrer dans la cellule !!!

 

Donc ATTENTION TON RADAR DOIT ÊTRE ACTIVE dès qu'on met "anticorps" et "cellule" dans le même item. C'est IMPOSSIBLE d'observer quoi que ce soit par des anticorps au sein d'une cellule vivante.

 

 

 

Courage Echo, c'est la dernière ligne droite, tu en es capable, nous on est là  

Merci beaucoup c'est beaucoup plus clair!

 

et merci vraiment c'est adorable