apoptose QCM

[la_jadénosine]

bonjour, je n'ai pas tres bien compris comment on lisait et interprétait ce graphique , et j'ai vu qu'il revenait souvent dans les qcm, si quelqu'un pouvait m'expliquer svp ?

https://drive.google.com/file/d/115hqHz-KownWDCwZhROkeTm2Q7T37F3S/view?usp=sharing

Edited November 28, 2020 by la_jadénosine

[dolyprane]

Coucouuu

 

Alors c'est très simple, même si on dirai pas ! 

 

Normalement tu as appris qu'une cellule peut mourir de 2 manières : soit par apoptose soit par nécrose. Chaque mort a des caractéristiques spécifiques qui fait qu'on va pouvoir savoir combien, dans un échantillon, de cellules sont mortes par apoptose ou par nécrose. Donc pour bien comprendre je vais te remettre les caractéristiques de chaque mort cellulaire : 

 

Caractéristique de la nécrose : Augmentation de la perméabilité de la membrane plasmique et de la membrane nucléaire (à cause de l'oxydation des lipides et des protéines), Vacuolisation des organites (et oxydation lipidique et protéique), production d'espèce réactive de l'oxygène (ROS) et une dégradation globale de l'ADN.

 

Caractéristique de l'apoptose : externalisation des phosphatidyl serine (PS), perméabilité modérée des membranes de la mitochondrie, action des caspases et fragmentation internucléosomale de l'ADN. 

 

Dans l'exercice on te dit qu'on incube les cellules avec de l'Annexine-V couplée au FITC (c'est juste ce qui donne la couleur verte) et de l'iodure de propidium. il faut que sache que : 

- L'annexine-V couplée au FITC se fixe sur les PS. Cependant, l'annexine ne peut pas passer la membrane sans qu'elle soit perméabilisée. Normalement, les PS sont situées sur le feuillet interne de la MP. Cependant dans l'apoptose, on observe une externalisation des PS. Les PS passent donc sur le feuillet externe de la MP dans l'apoptose, cela veut dire que les cellules apoptotiques seront marquées à l'annexine V-FITC. Mais, pas seulement ! Et oui, car la nécrose augmente la perméabilité des membranes donc l'annexine va pouvoir la traverser et se fixer sur les PS du feuillet interne de la MP. Les cellules apostoliques et nécrotiques seront marquées à l'annexine V-FITC (qui fluoresce dans le vert).

- L'iodure de propidium (IdP) s'intercale dans les liaisons de l'ADN MAIS il ne peut passer la membrane plasmique et nucléaire si et seulement si ces membranes sont perméables. Et on a de la chance puisque la perméabilité de la membrane augmente seulement dans la mort par nécrose. Cela veut dire que les cellules qui sont mortes par nécrose vont être marquées par l'IdP (qui fluoresce dans le rouge). 

 

C'est ce que te reprend ce schéma que tu as dans ton cours :

 

Une fois que tu sais ça, c'est bon l'exercice est fait et tu as +1 et tu passes a la suite. Sur le graphique tu as deux "barres" perpendiculaires qui représentent des seuils de positivité : c'est à dire dès que la cellule dépasse ce seuil, on considère qu'elle est marquée. 

Le seuil vertical représente le seuil de positivité à l'annexine. donc tout ce qui est à droite de ce seuil sera considéré comme marqué à l'annexine-FITC. 

Le deuxième seuil qui lui est horizontal est celui de l'IdP, donc tout ce qui est au dessus de ce seuil sera considéré comme marqué à l'IdP. 

 

 

NB : dans ce type d'expérience on ne perméabilité JAMAIS la cellule, sinon ça ne servirait à rien puisque toutes les cellules seront marquées à l'IdP et l'annexine V-FITC. 

 

Et maintenant c'est un jeu d'enfant. J'espère que c'est plus clair pour toi maintenant ! Si tu veux t'entrainer pour devenir incollable, il y a des exercice types dans le poly de l'avent

 

Bon courage pour les révisions !