AlineB Posted February 28, 2015 Posted February 28, 2015 Bonsoir je me suis juste répertoriée quelques points sur lesquels j'ai des pbs ou incompréhensions concernant le TD 1 de recherche ( qui exploite le cours de Mr Levade) - QCM 3: item B je n'ai pas réussir à voir que ça fonctionnait dans les deux sens - QCM 10: item C et D: je ne trouve pas les bons résultats , je trouve l'inverse donc je me demande si mon erreur vient pas de l'orientation des brins d'ADN : je pensais que "le sens de migration" était équivalent à dire que l'on commençait par 5' même souci QCM 16 : item A je ne trouve pas la bonne réponse du moins pas la bonne orientation donc je voudrais avoir la confirmation du sens à employer puisque au premier quad il me semble que Mr Levade m'avait dit que lorsque rien n'était indiqué c'était de 5' vers 3' mais peut être que je confonds avec autre chose ... - QCM 19: item B je ne comprends pas trop la réponse puisque la stringence augmente lorsque la force ionique diminue donc pourquoi est ce que le manque de signal ne pourrait pas résulter d'une concentration en sels trop élevée ? Voilà je crois que j'ai fait le tour , un grand merci à ceux qui me viendront en aide pour ces interrogations ^^ Bonne soirée et bonne fin de week-end Aline
HansHubberform Posted March 7, 2015 Posted March 7, 2015 Hola, Trop de stringence ca peut rendre trop difficile à tes brins de s'hybrider il me semble, du coup il faut un minimum de stringence pour eviter trop de contamination mais aussi pas trop pour avoir quelque chose (me semble.........) Sanger : lire 5' 3' de bas en haut normalement, apres j'ai pas ton poly de td sous les yeux :/ Le 16 : ton ADNc est double brin, donc il faut considerer ces deux brins (même chose, j'ai pas ton poly sous les yeux ^^) pour ce qui est de l'insertion des inserts et vecteurs, je te fais un copié-collé, je sais pas si c'est ca qui te gene ou pas : Pour savoir dans quel/combien de sens s'insère un insert j'utilise cette méthode pour savoir quels sont les bouts libres : Je mets une barre (en pointillés si tu veux), à distance équivalente des deux cotés, ce qui est au milieu donnera l'extremité libre Taq1 : 5' T/CGA 3' : la barre est à une base du début, elle sera à une base de la fin Taq1 : 5' T/CG/A 3' Bouts libres TaqI : CG Cla1 : 5' AT/CGAT 3' barre est à 2 bases du début, elle sera à 2 bases de la fin Cla1 : 5' AT/CG/AT 3' Acc1 : 5' GT/CGAC 3' même chose, ici l'extremité libre sera 5 CG 3 Les 3 enzymes ont les memes extremités libres, donc en les utilisant on pourra avoir l'insertion de l'insert et dans ce cas dans les deux sens (cla aci et tacI utilisés) Ca c'est l'exemple de 2 sens : 5' GC 3' se lie a 3' CG 5' et pareil de l'autre coté. ________ maintenant, si jamais les 2 extremités de ton insert sont differentes, alors il ne pourra s'inserer que d'un coté. exemple (en considerant qu'il y ait les sites) : Taq1 : 5' T/CGA 3' CG Cla1 : 5' AT/CGAT 3' CG Acc2 : 5' GT/ATAC 3' AT Imagine ton insert coupé par Taq1 et ACc2 Ton plasmide coupé par Acc2 et Cla1 Là, les deux extremites de ton insert sont differentes, AT ne peut pas se lier a CG, mais qu'à AT, donc un seul sens PS : CG s'insere avec CG mais pas avec GC, d'ou l'interet de lire la sequence et de ne travailler qu'avec le bout de sequence donné Voila, j'espere que ca peut repondre un peu, mais si ça répond pas, hésite pas à passer a la permanence avec ton poly de TD
Solution AlineB Posted March 7, 2015 Author Solution Posted March 7, 2015 Merci beaucoup d'avoir répondu ! Mais je pense que je vais passer pour être sûre d'avoir bien compris ... Pour la stringence tu as raison je pense ! et après pour la migration moi j'ai lu de 5' en 3' en partant du haut donc je crois que c'est la source de mon erreur ... Bref, je passerai mais merci d'avoir pris le temps !
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