Sujet type 2 Noël R19

[OxyGenS]

Bonsoir !

Dsl j'ai pas mal de questions

 

1) 17B : "Un patient est porteur d’une tumeur dans le foie, dont l’origine n’est pas connue. On prélève donc les ARN totaux d’une cellule cancéreuse ainsi que ceux d’une cellule hépatique saine pour pouvoir les étudier :

Après le passage sur la colonne, l’élution des ARNm isolés et purifiés se fait en condition de faible force ionique." --> VRAI.

Ca fait quoi si on a une force ionique importante ?

 

2) Parmi les éléments transposables, seuls les transposons ne peuvent pas passer sous une forme libre extracellulaire ?

 

3) Dans les puces à ADN quand on a par exemple une case bleue c'est que le cDNA marqué (donc l'ARNm correspondant) en bleu s'exprime +++ mais que peut-on déduire de sa localisation sur la puce ?

 

ex : pour cette puce comment interprète-t-on le fait qu'à certains endroits précis on ait un losange ou au contraire une étoile ?

"Après avoir obtenu une banque d’ADNc pour les 2 types cellulaires (cellules cancéreuses et cellules hépatiques saines) et les avoir marqués avec 2 fluorochromes différents (cellules cancéreuses en étoile, cellules saines en losange), on réalise une puce à ADN. Les cases blanches sont les cases où aucun ARN ne s’est hybridé."

https://zupimages.net/viewer.php?id=20/48/rzzo.png

 

4) 21A : https://zupimages.net/viewer.php?id=20/48/wyqb.png

FAUX : "Il n’a pas utilisé les bonnes amorces". Si on utilise les bonnes amorces, la contamination "disparaît" ? Je pensais que dans tous les cas on aurait cette bande et que ça empêcherait l'interprétation des résultats.

 

5) 23B vrai : https://zupimages.net/viewer.php?id=20/48/wlv8.png

https://zupimages.net/viewer.php?id=20/48/5ao0.png

C'est pcq on sait que le père n'a pas de mutation donc il a la même séquence que le sujet A et celle-ci ne peut pas être clivée par PpaxII (car non reconnue) ?

 

Pour le 23E faux (j'ai compris la correction) on nous dit en justification que ce n'est pas une enzyme de restriction. On est censé le savoir ?

 

Merci

[alpanda]

Salut @OxyGenS ! 

 

1) Ici on purifie les ARNm dans une colonne de chromatographie d'affinité à partir des ARN totaux. Donc on les met dans la colonne avec des oligo-dT par exemple, pour que seuls les ARNm matures (avec poly A) se fixent et soient retenus dans la colonne. Pour éluer les autres ARN, on met un tampon de forte force ionique qui déstabilise les liaisons non spécifiques. On n'a donc dans notre colonne encore les ARNm liés sépcifiquement aux oligo-dT. Pour les éluer (l'item fait référence à cette étape), on rajoute un tampon de faible force ionique qui déstabilise ici les liaisons spécifiques : on récupère ainsi nos ARNm. Donc pour répondre à ta question, la forte force ionique enlève les ARN non fixés, on ne pourrait donc pas récupérer les ARNm.

 

2) Non, en fait, les éléments transposables des eucaryotes (dont les transposons) ne passent pas sous une forme libre extracellulaire. Les phages, virus et plasmides peuvent être sous forme libre eux.

 

3) En fait chaque dans chaque puits on dépose des cDNA, qui réagissent ou pas. La disposition des cases est aléatoire, tu ne peux rien interpréter. Ce qu'il te faut interpréter c'est la proportion de réactions. Par exemple ici tu peux avoir une idée de combien de cellules saines tu asVS combien de cellules cancéreuses.

 

4) La 21 A est fausse parce qu'ici c'est une contamination, ce n'est pas un problème de température (comme c'est le cas lors d'une amplification parasite)--> Voilà la correction que j'aurais mis, elle me parait plus appropriée et évidente. Je suis d'accord avec toi je ne vois pas le rapport avec les amorces puisqu'on a une base avant même l'utilisation des amorces. 

 

5) 

Il y a 12 heures, OxyGenS a dit :

C'est pcq on sait que le père n'a pas de mutation donc il a la même séquence que le sujet A et celle-ci ne peut pas être clivée par PpaxII (car non reconnue) ?

Exactement ! on nous dit implicitement qu'il est homozygote pour la même séquence que A donc que l'enzyme ne coupe pas et donc on a qu'une bande.

 

Pour la 23E : c'est faux parce que ce n'est pas un palindrome ? si oui, ne t'embêtes pas le Pr Levade ne piège pas là-dessus, c'est juste un petit piège du TAT pour que vous soyiez toujours vigilants 

 

Est-ce que tu as tout compris ? 

Bonne journée à toi ! 

[OxyGenS]

il y a 32 minutes, alpanda a dit :

Pour la 23E : c'est faux parce que ce n'est pas un palindrome ? si oui, ne t'embêtes pas le Pr Levade ne piège pas là-dessus, c'est juste un petit piège du TAT pour que vous soyiez toujours vigilants 

Dans tous les cas c'est faux pcq la séquence que cette enzyme est censée couper est présente chez tout le monde donc on n'aurait pas eu les mêmes résultats qu'avec PpaxII.

Dans la correction on nous dit que ce n'est pas une enzyme de restriction mais en effet c'est pcq c'est pas palindromique.

 

Le reste c'est bon ! Merci bcp, tu gères