Production d'anticorps monoclonaux

[Sulnac]

Bonsoir, après la sélection et le clonage des hybridomes je ne comprends pas comment se déroule la production en masse des anticorps. Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer ? Merci.

Edited November 18, 2020 by Sulnac

[sanchocarotidien]

Bien le bonsoir @Sulnac,

 

je vais essayer de t'éclairer sur ce point comme je peux.

 

Une fois que tu as tes hybridomes (fusion d'un LT avec un myélome) et que tu les as clonés, tu sélectionnes lesquels de tes clones sont sécréteurs de l'anticorps monoclonal que tu cherches à produire (technique Elisa par ex).

 

Cette étape faite, tu as ton clone sécréteur mais ton but c'est de produire en grande+++ quantité, pour ce :

-1ère méthode dans le ventre d'une petite souris toute mimi: tu lui injectes dans le péritoine les clones, ça crée une inflammation donc ça produit plein d'Ac et tu prélèves le liquide d'ascite (issu du péritoine) qui contient une concentration +++ en Ac monoclonaux. Point positif: 5-20mg Ig/mL    Point négatif: pb d'éthique puisque tu fais souffrir la souris.

 

-2 ème méthode: culture in vitro et multiplication de tes hybridomes sélectionnés. Point positif: pas de Ratatouille utilisée    Point négatif: quantité + (10-100microgr Ig/mL)

 

Ps: les chiffres ne sont pas a apprendre bien évidement 

Voili voilou

 

[Sulnac]

D'accord merci c'est clair et le clonage consiste à multiplier les hybridomes placés initialement séparément dans un puits?

[sanchocarotidien]

Il y a 9 heures, Sulnac a dit :

le clonage consiste à multiplier les hybridomes placés initialement séparément dans un puits?

 

Les profs ne sont jamais vraiment rentrés dans les détails par rapport au clonage mais une fois que tu as tes hybridomes positifs tu les mets individuellement dans un puit pour ensuite pouvoir faire ton criblage et déterminer lesquels précisément sécrètent l'Ac monoclonal qui t'intéresse.

Si tu ne passes pas par cette étape et que tu mettais plusieurs hybridomes dans le même puit, tes résultats de criblage pourraient être faussés.

 

C'est pas l'étape de production des Ac monoclonaux à savoir en détail honnêtement, juste savoir qu'elle est là, à ce moment là et qu'elle se fait par "dilution limite".