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[Pikachumab]

Boujour,

Je n'arrive pas très bien à comprendre le principe de PCR (quantitative ou en temps réel) et la RT-PCR, et j'ai remarqué que beaucoup de questions en QCM tombent la dessus (bien plus que sur le cours malheureusement). Si quelqu'un avait la foi de m'expliquer !!

 

Merci d'avance et bon après-midi !

[lajuxtaposé]

Bonjour à toi

 

Je ne sais pas avec quel prof vous avez vu ça donc ce que je vais te dire est à prendre avec des pincettes pour déjà aborder le concept de cette méthode d'analyse génétique

 

 

 

Ci-dessus je t'ai mis les graph que tu obtiens quand tu fais une PCR quantitative ou en temps réel dans ton laboratoire 

 

Le but d'une PCR est avant tout d'amplifier l'ADN (ou l'ARN recueilli) car on en a beaucoup trop peu pour l'étudier. On fait donc une amplification en une trentaine de cycle généralement afin d'en obtenir beaucoup (je ne te détaille pas ici l'amplification mais si c'est nécessaire n'hésite pas).

 

La PCR quantitative permet de quantifier la quantité d'ADN ou d'ARN que l'on avait initialement : comment déduire cette information des graphiques ci-dessus ? C'est très simple : plus la courbe est à gauche <==> plus elle apparait rapidement <==> plus il y avait de matériel génétique initialement. On appelle cette méthode PCR en temps réel car dans les labos les techniciens voyaient les courbes se dessiner en temps réel sur leur écran ! 

 

Enfin, les courbes représentent la quantité d'ADN que l'on quantifie par densité optique : pour cette technique on marque l'ADN avec un marqueur fluorescent intercalent.

 

La RT-PCR quantitative c'est exactement la même chose sauf qu'on récolte de l'ARN que l'on va rétro transcrire en cDNA car plus stable et plus facile à manier. 

 

En pratique, même si cela ne se fait pas, on pourrait dans un test Covid faire une PCR quantitative pour quantifier la charge virale du patient (cela ne se fait pas car cette méthode est onéreuse et aussi car cela ne serait pas forcément informatif pour pleins de raisons)

 

 

J'espère que cela te permettra d'aborder cette partie de manière plus pratique et ludique !

 

 

Bonne journée 

 

Edited November 15, 2020 by lajuxtaposé

[Pikachumab]

Salut @lajuxtaposé, tout d'abord merci beaucoup pour tes explications très claires, je ne voudrais pas abuser de ton temps mais si tu peux aussi me détailler l'amplfication ça serait cool (si tu n'as pas le temps ce n'est pas grave). Deuxièmement est ce que pour la RT-PCR est ce que c'est l'ADNc que l'on amplifie ou directement l'ARN et ensuite on le remet en ADN ? Je ne sais pas si c'est très clair mais si ça ne l'est pas je veux bien essayer de reformuler ma question

 

 

Edit: Si tu comprend aussi pourquoi la C est vrai je veux bien que tu m'expliques parce que pour moi il y a le codon stop donc on ne va pas jusqu'au 79ème exon ! Et idem pour la D

 

 

 

Edited November 15, 2020 by choco2late