techniques ;-)

[lacelluledu66]

Bonjour!

1. par rapport à la technique d'hybridation insitu : je n'ai pas hyper bien compris comment se faisait la détection des ARNm codant pour une protéine donnée ; comment les sondes spécifiques marquées à la digocigénine permettent-elles la révélation? svp

 

2. qu'est-ce qu'une sonde froide? svp

 

3. qu'est-ce qu'une translocation réciproque entre 2 chromosomes? svp

 

4. comment des ARNm d'origine virale peuvent être mis en évidence dans une cellule infectee en culture cell apres hybridation avec une sonde ADNc spécifique? svp

 

5. je ne vois pas ce qui est faux dans cet item svp : en microscopie confocale on peut observer le mouvement de macromolécules marquées par des anticorps fluorescents dans des cellules vivantes ?

 

6. est-ce que qqn saurait quelles microscopies mis à part le contraste de phase permet de voir des cellules vivantes en mouvement? svp

 

merciii

[Darsalade]

Salut à toi ! @Larab

 

1.  Comment se fait la détection d'ARNm codant pour une protéine donnée ? Comment les sondes spécifiques marquées à la digocigénine permettent-elles la révélation?

 

-> Pour détecter un ARNm par hybridation in situ il faut synthétiser une sonde complémentaire et antiparallèle qui va se lier à cette ARNm 

-> Vue que c'est de l'ARNm c'est sous forme monocaténaire donc il y'a pas besoin de le dénaturer ce qui aurait été le cas pour l'ADN

-> Mais pour détecter notre sonde il nous faut un marqueur, on a alors soit :

- Des sondes chaudes : Dont les nucléotides sont radiomarqués à l'aide d'éléments radioactifs comme le Souffre 35 dont la révélation se fait par autoradiographie

- Des sondes froides : On va soit former des chaîne biotinylée en couplant des enzymes associé à la biotine ainsi que des avidine

Ou alors on peut utiliser des digocigénines qui sont des molécules de marquages qui se fixent sur les chaînes latérales de la sondes auxquelles on ajoutera des anticorps anti-digoxigénine et un anticorps secondaire marqué par une enzyme pour amplifier le signal et pouvoir le capter

 

2. Qu'est-ce qu'une sonde froide?

 

C'est une sondes synthétisée formée de nucléotides que l'ont va marquer sans utiliser la radioactivité donc avec des marqueurs comme la biotine/avidine, la digoxigénine, la fluorescence etc.. On dit que la chaîne latérale est secondairement révélée car on utilise plusieurs molécules pour amplifier le signal et détecter le signal

 

3. Qu'est-ce qu'une translocation réciproque entre 2 chromosomes ?

 

Lors d'une translocation réciproque entre 2 chromosome on a un échange de fragments de chromosomes entre 2 chromosomes non homologues

 

 4. Comment des ARNm d'origine virale peuvent être mis en évidence dans une cellule infectée en culture cellulaire après hybridation avec une sonde ADNc spécifique?

Comme indiqué tout à l'heure après l'hybridation avec une sonde spécifique pour mettre en évidence l'ARNm il faut utiliser les techniques de marquages d'hybridation in situ auxquelles on pourra y associer des marquages immunoenzymatiques, d'immunofluorescence.

 

Il y a 1 heure, Larab a dit :

5. je ne vois pas ce qui est faux dans cet item svp : en microscopie confocale on peut observer le mouvement de macromolécules marquées par des anticorps fluorescents dans des cellules vivantes ?

Pour cette question je te renvoie à ce sujet  

6. Quelles microscopies mis à part le contraste de phase permet de voir des cellules vivantes en mouvement ?

 

On peut utiliser des microscopes optiques sans coloration : Contraste de phase, interférentiel, fond noir, à polarisation 

la microscopie confocale, biphotonique et à fluorescence  

 

Bon courage !!  

Edited November 13, 2020 by Darsalade

[lacelluledu66]

@Darsalademerciii à toi!