d'autres questions sur les techniques ;)

[lacelluledu66]

bonjour!

1. Je ne comprends pas bien ce que sont les photo-dommages induits en microscopie confocale (effets thermiques, photo-blanchiment...)? svp

 

2. Pourquoi ne faut-il pas nécessairement déshydrater et métalliser un échantillon biologique avant de l'observe en microscopie confocale? svp

 

3. entre la MEB et la microscopie confocale, quelle technique est la plus adaptée à l'observation en relief d’échantillons biologiques vivants? svp

 

4. pourquoi la microscopie biphotonique est plus adaptée à l'observation du vivant que la microscopie confocale? svp

 

5. est-ce que qqn peut m'expliquer pourquoi cet item est faux svp : E. Un antigène reconnu par un anticorps marqué par un fluorochrome pourra être observé en microscopie à contraste de phase mais aussi en microscopie confocale ou biphotonique

 

merciiii

[LuluTRZ]

Hey ! 

 

Voici quelques réponses :

 

Le 10/11/2020 à 08:20, Larab a dit :

1. Je ne comprends pas bien ce que sont les photo-dommages induits en microscopie confocale (effets thermiques, photo-blanchiment...)? svp

L'excitation des atomes par la lumière (considérée comme une onde ou des photons portant de l'énergie) peut induire des détériorations des atomes et molécules (ionisations par exemple si l'énergie est trop forte). Or la technique de microscopie confocale utilise des rayons lumineux pour exciter les molécules fluorescentes, visibles lors de leur désexcitation, ce qui permet l'observation de diverses structures cellulaires. Ainsi la lumière utilisée peut créer des dommages sur les cellules observées. 

 

Le 10/11/2020 à 08:20, Larab a dit :

2. Pourquoi ne faut-il pas nécessairement déshydrater et métalliser un échantillon biologique avant de l'observe en microscopie confocale? svp

Parce que la déshydratation et la métallisation sont utilisées en microscopie électronique : la déshydratation pour éviter la formation d'artefacts (des perturbations de l'image obtenue en gros, ou une diminution de sa qualité) et la métallisation pour ne pas laisser passer certains électrons envoyés ce qui permet d'observer les structures en microscopie électronique. En microscopie confocale, on utilise des rayons lumineux donc il n'y a pas besoin de la même préparation.

 

Le 10/11/2020 à 08:20, Larab a dit :

3. entre la MEB et la microscopie confocale, quelle technique est la plus adaptée à l'observation en relief d’échantillons biologiques vivants? svp

Pour l'observation d'échantillons biologiques vivants je dirais que la microscopie confocale est plus adaptée mais il est dit dans le cours (partie TD) que "les photo-dommages limitent l'observation du vivant" (Dr Cyril Clavel) alors je ne suis pas sûr. Je te conseille de demander aux professeurs.

 

Le 10/11/2020 à 08:20, Larab a dit :

4. pourquoi la microscopie biphotonique est plus adaptée à l'observation du vivant que la microscopie confocale? svp

Ici c'est parce qu'il y a moins de photo-dommages car l'excitation des échantillons se fait sur une surface nettement plus réduite.

 

Le 10/11/2020 à 08:20, Larab a dit :

5. est-ce que qqn peut m'expliquer pourquoi cet item est faux svp : E. Un antigène reconnu par un anticorps marqué par un fluorochrome pourra être observé en microscopie à contraste de phase mais aussi en microscopie confocale ou biphotonique

 

Dans ce cas pour observer ton antigène tu as besoin d'exciter le fluorochrome qui émet de la lumière en se désexcitant. Seules les techniques de microscopie confocale et biphotonique le permettent. Cet item est donc faux car on ne peut pas observer l'antigène avec la microscopie à contraste de phase. 

 

En espérant t'avoir aidé ! 

 

Dis-moi si tu as d'autres questions 

 

 

[lacelluledu66]

@LuluTRZKikou, merci beaucoup pour tes réponses et oui j'ai d'autres questions donc je les pose ici

1. Pourquoi lors de la préparation de l'antisérum, l'étape de l'immunisation de l'animal doit se faire avec un antigène purifié? svp

 

2. est-ce que excitation confocale = excitation monophotonique? svp

 

3. par rapport à cet item : le microscope biphotonique, du fait de la meilleure pénétration du faisceau laser excitateur, permet de visualiser directement des échantillons plus épais que le microscope confocal ; cet item est vrai mais pourquoi "directement" est aussi compté comme vrai? svp

 

merciii

[Sarhabdomyocyte]

coucou, c'est moi qui passe te répondre hahha

 

Il y a 10 heures, Larab a dit :

1. Pourquoi lors de la préparation de l'antisérum, l'étape de l'immunisation de l'animal doit se faire avec un antigène purifié? svp

Pour qu'il n'y ait que des Ac dirigés contre l'antigène souhaité qui soient produits, et pas contre d'autres antigènes.

 

Il y a 10 heures, Larab a dit :

2. est-ce que excitation confocale = excitation monophotonique? svp

Contrairement à la microscopie biphotonique (qui, comme son nom l'indique, utilise deux photons incidents pour émettre un photon dans le visible), la microscopie confocale utilise un seul photon incident de plus haute énergie : c'est donc une excitation monophotonique.

 

Il y a 10 heures, Larab a dit :

3. par rapport à cet item : le microscope biphotonique, du fait de la meilleure pénétration du faisceau laser excitateur, permet de visualiser directement des échantillons plus épais que le microscope confocal ; cet item est vrai mais pourquoi "directement" est aussi compté comme vrai? svp

Parce que du coup, pas besoin de les couper plus finement pour pouvoir les observer !

 

Dis moi si tu as d'autres soucis  

[lacelluledu66]

@Sarhabdomyocytemerciii