Jeggys Posted November 6, 2020 Posted November 6, 2020 Bonjour, je ne comprend pas trop comment on peux obtenir les 3 bandes... La réponse est la B Merci d'avance ! QCM 2. On hybride (en milieu liquide) du DNA génomique, dénaturé et marqué par un isotope radioactif, avec un cDNA (copie complémentaire simple brin du messager mature d'une protéine), puis on fait agir une nucléase de type S1 (connaissant les propriétés de cette enzyme et sachant qu'elle est utilisée dans des conditions où elle dégrade complètement tout ce qu'elle peut dégrader). Après extraction des fragments d'ADN et dénaturation, on sépare les fragments par électrophorèse, puis on les visualise par autoradiographie. On observe 3 bandes. On peut déduire de cette expérience que : A/ le cDNA a été coupé en 2 endroits car il possède 2 sites de restriction (dont les séquences sont palindromiques) reconnus par la nucléase S1 B/ la partie de DNA génomique hybridée avec le cDNA contient probablement 2 introns C/ le cDNA contient probablement 2 introns D/ il existe très probablement 1 mutation ponctuelle à chacun des sites des coupures du DNA E/ la protéine codée par ce gène peut être obtenue par traduction in vitro de ce cDNA. E/ la protéine codée par ce gène peut être obtenue par traduction in vitro de ce cDNA. Quote
Ancien Responsable Matière lajuxtaposé Posted November 6, 2020 Ancien Responsable Matière Posted November 6, 2020 (edited) Salut ! Déjà il faut que tu saches que ta nucléase S1 ne clive que l'ADN ou l'ARN simple brin Tu vas avoir l'hybridation de ton cDNA (qui ne contient pas d'intron) avec un brin de l'ADN génomique : ton cDNA se fixe seulement sur une partie du brin de DNA génomique qui correspond aux exons. Or, tu as de part et d'autre du cDNA le brin d'ADN génomique "qui dépasse", qui ne s'est pas hybridé : il est donc simple brin de part et d'autre. C'est ce qui va être clivé et donner 2 bandes + 1 bande qui correspond au duplex cDNA/ADN Si tu veux que je reprenne tout le QCM et pas seulement ce à quoi correspondent les bandes c'est possible @Emmacarena il y a juste quelque chose qui me gène dans ce QCM : avec cette formulation, on pourrait aussi s'attendre à avoir 4 bandes : duplex ADN/ARN + 2 introns + ADN monocaténaire qui ne s'est pas hybridé ? La nucléase S1 ne fait que couper et pas dégrader totalement, sinon on ne verrait plus d'introns sur notre gel ? Bonne journée Edited November 6, 2020 by lajuxtaposé Quote
Jeggys Posted November 6, 2020 Author Posted November 6, 2020 (edited) Merci beaucoup pour ta réponse c'est plus clair pour les bandes @lajuxtaposé! Et oui, si ça ne te dérange pas je veux bien que tu reprennes le QCM pour m'assurer d'avoir compris quelques items notamment avec la position des introns à la B Edited November 6, 2020 by Jeggys Quote
Ancien Responsable Matière Solution lajuxtaposé Posted November 6, 2020 Ancien Responsable Matière Solution Posted November 6, 2020 (edited) il y a 58 minutes, Jeggys a dit : A/ le cDNA a été coupé en 2 endroits car il possède 2 sites de restriction (dont les séquences sont palindromiques) reconnus par la nucléase S1 Pour ceci, déjà tu as compris que ce n'est pas le cDNA qui est coupé et en plus la nucléase S1 ne reconnait pas de séquence palindromique, ce n'est pas une enzyme de restriction (c'est même tout le contraire, une enzyme de restriction ne peut agir que sur du double brin!!!) il y a 58 minutes, Jeggys a dit : B/ la partie de DNA génomique hybridée avec le cDNA contient probablement 2 introns le cDNA est un retrotranscrit de l'ARN qui a été épissé, donc le cDNA ne contient pas d'introns. C'est du coup forcément le DNA génomique qui contient les introns qui ne s'hybrident pas avec le cDNA et qui sont donc clivés (3 bandes = 2 introns + 1 duplex ADN/cDNA) il y a 58 minutes, Jeggys a dit : C/ le cDNA contient probablement 2 introns un cDNA ne peut pas contenir d'introns il y a 58 minutes, Jeggys a dit : D/ il existe très probablement 1 mutation ponctuelle à chacun des sites des coupures du DNA À mon avis aucun rapport avec notre expérience --> faux il y a 58 minutes, Jeggys a dit : E/ la protéine codée par ce gène peut être obtenue par traduction in vitro de ce cDNA. La traduction se fait sur de l'ADN et pas sur de l'ARN J'ai édité mon premier message j'avais écris une bêtise : ce n'est évidemment pas un duplex ARN/ADN mais un duplex DNA/cDNA Edited November 6, 2020 by lajuxtaposé Quote
Jeggys Posted November 6, 2020 Author Posted November 6, 2020 D'accord merci pour avoir pris le temps de répondre j'ai compris ! @lajuxtaposé lajuxtaposé 1 Quote
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