Température et hybridation

[Emma06]

Bonjour! J'ai un doute donc je préfère demander, lorsqu'on augmente la température d'hybridation, ça augmente la strigence mais il n'y a pas de valeur seuil? C'est toujours proportionnel?

[Emmastoïde]

Salut ! 

 

Alors non, il ne me semble pas qu'il y ai de valeur seuil donnée à retenir, mais en effet c'est proportionnel jusqu'à un certain seuil. Si la température devient trop élevée, le matériel génétique va être détérioré et détruit, donc oui il y a forcément une limite mais il ne me semble pas qu'elle soit donnée ni à retenir. 

 

Pour te donner un ordre d'idée, en principe pour dénaturer un ADN double brin (séparer les deux brins), on va le mettre en présence d'une température de 90/100°. 

Ensuite pour l'hybridation avec une sonde, qui est réversible, elle se fera aux alentours de 50-60°. 

 

Reprenons la notion de stringence : en fonction des conditions du milieu, la sonde s'hybridera + ou - spécifiquement 

-Si on est à basse stringence (faible température), l'hybridation sera possible même s'il y a quelques nucléotides de différence. 

-Si on est à haute stringence (aux alentours de la température haute limite permettant l'hybridation (au dessus on basculera vers la dénaturation)), on a une hybridation parfaite, les séquences entre le gène d'intérêt et la sonde sont complémentaires. 

 

Donc en effet, plus la température va augmenter, plus l'hybridation sera parfaite.

Mais au bout d'un certain moment (pas forcément de valeur seuil à connaître par rapport à la limite d'hybridation), il doit bien y avoir une limite particulière mais il ne me semble pas qu'elle fut un jour abordée en cours

 

Bon courage ! 

[Emma06]

Merci beaucoup @Emmastoïdej’avais un doute sur cette stringence tu m’a tout remis au clair merciii