Lemillion Posted November 5, 2020 Posted November 5, 2020 (edited) salut, dans le cours sur les compléments des techniques, on voit en dernier le principe des étiquettes avec par exemple la GFP qui permet la fluorescence de la protéine d'interêt on voit donc que l'on place avant le DNAc de la protéine d'interêt une séquence étiquette qui correspond au gène de la GFP, en résulte une protéine de fusion qui correspond à notre protéine d'interet mais fluorescente cependant le fait de fusionner 2 protéine va bien modifier la structure protéique de la protéine de fusion imaginons une protéine d'interêt avec un domaine qui sert à la fixation d'une autre protéine la fusion avec la GFP va modifier la conformation de la protéine et ainsi peut être modifier ce site de fixation la protéine de fusion ne pourrait alors plus reconnaitre l'autre protéine et ainsi perdre sa fonction je sais que c'est très probablement hors programme je vais retenir que la protéine de fusion est toujours fonctionnelle mais ça m'intrigue Edited November 5, 2020 by Lemillion Quote
Ancien Responsable Matière Solution Claro Posted November 5, 2020 Ancien Responsable Matière Solution Posted November 5, 2020 Hellooo @Lemillion Alors justement en pratique quand on fait ce genre de choses on va faire une protéine de fusion Et on va tester via la co-immunoprécipitation si elles interagissent encore !! Tu vas avoir deux protéines: - Une naturelle - Une protéine de fusion (naturelle + GFP) Et ton récepteur Tu peux par exemple fixer ton récepteur sur une bille et le mettre en contact - Situation 1: avec la protéine naturelle - Situation 2: avec la protéine de fusion Tu vas vérifier avec un western blot en utilisant un anticorps dirigé contre la protéine (naturelle + de fusion) Si tu as une bande pour les deux → OK TA PROTIEINE DE FUSION INTERAGIT TOUJOURS (gros youpi) donc tu peux l'utiliser pour ton expérience Si tu as une seule bande pour la protéine naturelle: gros snif, ta protéine de fusion interagit pas donc bah, à refaiiiiiire Si tu as aucune bande (gros oups): soit t'as mal fait ton expérience (nullos), soit t'as utilisé le mauvais anticorps (nullos), soit ta protéine a été dégradée (bah alors on a mal fait sa purification), ou en bref, y a un truc qui cloche, à revoiiiir Donc en gros ca te permet de voir si ta protéine est fonctionnelle !! C'est clair ? Bon couraaaage Quote
Lemillion Posted November 5, 2020 Author Posted November 5, 2020 il y a 1 minute, Claro a dit : Hellooo @Lemillion Alors justement en pratique quand on fait ce genre de choses on va faire une protéine de fusion Et on va tester via la co-immunoprécipitation si elles interagissent encore !! Tu vas avoir deux protéines: - Une naturelle - Une protéine de fusion (naturelle + GFP) Et ton récepteur Tu peux par exemple fixer ton récepteur sur une bille et le mettre en contact - Situation 1: avec la protéine naturelle - Situation 2: avec la protéine de fusion Tu vas vérifier avec un western blot en utilisant un anticorps dirigé contre la protéine (naturelle + de fusion) Si tu as une bande pour les deux → OK TA PROTIEINE DE FUSION INTERAGIT TOUJOURS (gros youpi) donc tu peux l'utiliser pour ton expérience Si tu as une seule bande pour la protéine naturelle: gros snif, ta protéine de fusion interagit pas donc bah, à refaiiiiiire Si tu as aucune bande (gros oups): soit t'as mal fait ton expérience (nullos), soit t'as utilisé le mauvais anticorps (nullos), soit ta protéine a été dégradée (bah alors on a mal fait sa purification), ou en bref, y a un truc qui cloche, à revoiiiir Donc en gros ca te permet de voir si ta protéine est fonctionnelle !! C'est clair ? Bon couraaaage ça fait un bail claro, j'espère que t'as la forme ! merci pour cette réponse plus que complète tout est ok Claro 1 Quote
Ancien Responsable Matière Claro Posted November 5, 2020 Ancien Responsable Matière Posted November 5, 2020 il y a 8 minutes, Lemillion a dit : ça fait un bail claro, j'espère que t'as la forme ! Owiii ça fait très longtemps Je ne veux pas quitter définitivement ce forum encore hihi J'espère que tu vas super bien aussi, bon courage pour cette année (C'est si miss ) Lemillion 1 Quote
Lemillion Posted November 5, 2020 Author Posted November 5, 2020 il y a 36 minutes, Claro a dit : Owiii ça fait très longtemps Je ne veux pas quitter définitivement ce forum encore hihi J'espère que tu vas super bien aussi, bon courage pour cette année (C'est si miss ) t'es ici chez toi reste autant que tu le souhaites tranquille ahaha, merci bcp Petit_Bateau and Claro 2 Quote
Ancien Responsable Matière Claro Posted November 6, 2020 Ancien Responsable Matière Posted November 6, 2020 Il y a 14 heures, Lemillion a dit : t'es ici chez toi reste autant que tu le souhaites tranquille ahaha, merci bcp Avec grand plaisiiir Lemillion 1 Quote
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