Elution

[Sulnac]

Bonjour, est-ce que qu'un qu'un pourrait m'expliquer à quoi correspond l'élution dans une chromatographie. Merci.

[SoFosBuVir]

Bonsoir @Sulnac ! En espérant que ça se passe bien pour toi malgré ce confinement.

 

 

Avant tout je vais te rappeler le but d'une chromatographie, c'est une technique de PURIFICATION des protéines notamment ( ici en biochimie ça servira largement pour les protéines ), autrement dit elle sert à purifier un échantillon, c'est à dire à récupérer notre protéine d'intérêt ( on l'appellera X ici ) de façon spécifique et ce par rapport aux protéines présentes dans le mélange.

Alors l'élution dans une chromatographie correspond à la dernière étape de celle-ci. En effet je te les récapitule dans l'ordre avant de te les expliciter. Dans un processus de chromatographie tu as donc ( c'est le schéma basique, d'autres étapes intermédiaires peuvent exister mais la on va faire simple ) :

- La charge 

- Le lavage 

- L'élution 

 

Ok so...

 

La charge : C'est donc la première étape de cette technique qui va constituer à placer ton mélange ou échantillon au sein de la colonne de chromatographie, à partir de la en fonction du type de chromatographie ( échangeuse d'ions, gel-filtration, affinité... ) on va avoir des forces "d'attraction" permettant de retenir avec plus ou moins d'intensité des protéines en fonction de leur structure sur la colonne de la chromatographie. C'est donc une étape un peu brute ou on retrouve encore dans la colonne toutes les protéines.

 

Ensuite vient le lavage : Elle consiste à introduire une solution de lavage dans la colonne pour "décoller" ou "enlever" si tu préfères l'ensemble des protéines qui n'auraient pas interagit avec les éléments de la colonne ( cf type de colonne comme je t'ai dis ), permettant ainsi de récupérer donc tout ce qui nous intéresse pas, autrement dit tout sauf X ( tu sais la fameuse protéine qu'on cherche à isoler au sein du mélange ).

 

L'élution vient alors en tant que dernière étape : Ici, tu es d'accord avec moi il reste sur ta colonne de chromatographie un seul type de protéine qui est ta protéine d'intérêt qui avait une interaction suffisante avec les éléments de la colonne pour résister au lavage. On applique donc une deuxième solution ici dite d'élution pour DECOLLER DE LA COLONNE DE CHROMATOGRAPHIE NOTRE PROTEINE D'INTERET QUE L'ON RECUPERE ALORS. Comment ça se fait ? Toujours pareil par une affinité supérieure de l'éluant ou solution d'élution avec les éléments de la colonne par rapport à l'affinité de notre protéine X avec la colonne. 

 

Voila donc pour résumer tout ce blabla il faut que tu saisisses que la chromatographie c'est pour purifier donc séparer sur la colonne différentes protéines d'un mélange, cette séparation permettant alors de les récupérer de façon différentielle pour ensuite en faire ce que tu veux.

 

Peut être que tu avais compris tout le reste mais dans le doute j'ai préféré réexpliquer ! 

En espérant avoir éclairé ta lanterne. Bonne fin de soirée et bon courage pour cette période un peu particulière !

[Sulnac]

Bonsoir @SoFosBuVir, merci beaucoup c'est très clair et oui tu as bien fait de m'expliquer les étapes précédentes, sur la colonne dans quel sens est le gradient de pH (augmente de bas en haut ou le contraire), pour savoir quelles seront les premières protéines à être éluées! Merci.