faq Posted December 20, 2014 Posted December 20, 2014 Bonjour, Je ne comprends pas très bien l'étape de pré-hybridation dans le Southern En quoi consiste-t'elle exactement? ( Pourquoi rajoute-t'on ADN "hétérologue" etc...? )
Solution MelanieK Posted December 21, 2014 Solution Posted December 21, 2014 Bonjour ! L'étape de pré-hybridation a lieu après le transfert des ADN du gel d'électrophorèse sur la membrane de nylon ou nitrocellulose. On utilise pour cela un ADN hétérologue, c'est-à-dire un ADN qui n'a "pas" d'homologie avec l'ADN que tu as fait migrer. Par exemple, tu as fait migrer de l'ADN humain, tu feras la pré-hybridation avec de l'ADN issu de sperme de saumon (si si, je te promets, c'est ce qu'on fait le plus souvent !). Cet étape sert à saturer la membrane de nitrocellulose, pour que les sondes s'hybrident uniquement sur l'ADN d'intérêt, et pas n'importe où sur la membrane. En effet, la membrane est faîte de telle sorte que tout ADN qui passerait à proximité se fixe dessus. Du coup, quand tu mets ta membrane dans ton bain de sondes marquées, quand tu feras la révélation, tu auras un signal partout, et tu ne pourras donc pas identifier ta séquence d'intérêt. J'espère que c'est plus clair, n'hésite pas à poser des questions plus précises pour que je puisse mieux répondre à ta question si besoin ! Bon courage pour les révisions !
faq Posted December 21, 2014 Author Posted December 21, 2014 Merci beaucoup c'est nettement plus clair !
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