immuno qcm

[carolineb]

Bonjour! 

 

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La tremblante du mouton (« Scrapie » en anglais) est une neuropathie dégénérative caractérisée par la présence d’agrégats de protéines « Prion » (PrP) dans le système nerveuxcentral (SNC) des animaux malades.

On y observe deux formes de PrP : la protéine cellulaire normale (PrPc) et une forme responsable des agrégats (PrPsc :PrP de là «Scrapie»).

Ces deux formes protéiques ont la même séquence primaire et ne présentent aucune modification post-traductionnelle. Vous suspectez donc que la PrPsc présente une conformation anormale.

 

Un antisérum (AS) de lapin anti-PrPc parfaitement caractérisé est disponible.
Après avoir traité (+) ou non (-) par la protéinase K (prot.K), des extraits protéiques du SNC d’animaux sains ou malades et les avoir séparés en PAGE-SDS, vous les analysez par immunotransfert (Western blot) à l’aide de l’AS et d’un anticorps secondaire adapté.

La prot.K dégrade complètement la protéine PrPc en petits fragments non décelables.

 

 

QCM 15 Parmi les interprétations suivantes de la Figure ci-dessus, la (les)quelle(s) est (sont) exacte(s) ?

 

 

 

D." Vous pouvez déduire de cette analyse que l’AS reconnaît un épitope conformationnel présent uniquement sur la PrP c" --> FAUX

E. "Vous pouvez déduire de cette analyse que l’AS reconnaît un épitope séquentiel présent uniquement sur la PrP sc" --> FAUX

 

j'aurais mis les 2 faux parce qu'on ne peut pas savoir seulement avec l'image, c'est ça ou il y a autre chose à comprendre? 

 

 

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Dans le cadre d’un programme de recherche sur le cancer du rein, vous entreprenez de produire des anticorps monoclonaux (ACm) de souris contre de nouveaux antigènes tumoraux. Vous disposez d’une lignée cellulaire humaine (CR) dérivée d’un cancer du rein et de tissu provenant de la même tumeur.

Vous avez immunisé une série de souris avec un extrait de protéines solubles de la lignée CR et vous mettez en œuvre la production d’ACm selon la technologie des hybridomes. Afin d’identifier tous les ACm reconnaissant un antigène exprimé par la lignée CR, vous allez associer plusieurs méthodes de criblage.

 

QCM 21 Parmi les propositions suivantes, la (les) quelles(s) de ces technique(s) vous semble(nt) utilisable(s) ?

 

 

E. "Vous pouvez cribler les surnageants des hybridomes par immunotransfert (immunoempreinte), à partir d’un extrait protéique des cellules de la lignée CR". --> VRAI

 

mais l'immunotransfert ne permet pas de cribler les surnageants si?

 

 

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QCM 22 : Vous avez sélectionné, par immunofluorescence indirecte sur les cellules de la lignée CR, 4ACm (A, B, C, D) dont vous voulez analyser la réactivité en détail.

Sur des immunotransferts (immunoempreintes) réalisés à partir d’un extrait contenant les protéines solubles du tissu tumoral, l’ACm A reconnaît une bande de 100 kDa. L’ACm B reconnaît une bande de 70 kDa et une bande 100 kDa. L’ACm C reconnaît une bande de 80 kDa. L’ACm D ne présente aucune réactivité.

En immunofluorescence indirecte sur cryocoupes de tissu tumoral, vous observez un marquage avec les 4 ACm mais A, B, C, D marquent spécifiquement les cellules cancéreuses, alors que C marque les cellules cancéreuses et les cellules normales.

 

 

D. "La réactivité de l’ACm C avec les cellules normales témoigne d’une erreur expérimentale puisque l’ACm a été produit à partir de la lignée de cellules cancéreuses." FAUX

 

pourquoi c'est faux? l'AcMc a bien été produit à partir de CR non?

 

 

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QCM 23 : Vous souhaitez caractériser les antigènes reconnus par les ACm et spécifiquement exprimés par les cellules cancéreuses.

Pour la résolution de cet exercice, considérez qu’une protéine est pure lorsqu’elle ne donne qu’une bande en SDS-PAGE.

 

 

C. "Afin d’obtenir un antigène spécifique des cellules tumorales, vous devrez purifier l’antigène reconnu par C, à partir de la lignée cellulaire CR" FAUX, tjrs pareil je vois pas pourquoi.. CR correspond bien à la lignée dérivée du cancer 

 

D. "L’ACm D peut être écarté d’emblée pour immunoprécipiter l’antigène qu’il reconnaît, à partir des protéines solubles du tissu tumoral". FAUX, étant donné qu'en immunofluorescence indirecte l'ACmD ne reconnait rien pourquoi on ne peut pas l'écarter? 

 

un grand merci d'avance! 

[Metallica]

Salut @carolineb

 

  On 5/26/2020 at 9:32 AM, carolineb said:

D." Vous pouvez déduire de cette analyse que l’AS reconnaît un épitope conformationnel présent uniquement sur la PrP c" --> FAUX

E. "Vous pouvez déduire de cette analyse que l’AS reconnaît un épitope séquentiel présent uniquement sur la PrP sc" --> FAUX

 

j'aurais mis les 2 faux parce qu'on ne peut pas savoir seulement avec l'image, c'est ça ou il y a autre chose à comprendre? 

Expand  

 

Alors si on peut le savoir ;))

 

Dans l'énoncé, on te dit que la protéinase K dégrade la PRPc or tu peux voir qu'après action de celle-ci sur les extraits d'animaux malades, on a toujours une bande à 30kDa ce qui signifie que non seulement la forme anormale (PrPsc) n'est pas dégradée (cf cours de biocell  partie cytosol ;)) par la protéinase K mais qu'en plus elle présente un même épitope similaire à celui qui a été reconnu  chez PrPc. A partir de là, tu peux mettre les 2 items faux parce que l'épitope est présent sur les 2 formes et non sur une seule (et la A doublement fausse parce que c'est un séquentiel qui est reconnu).

 

 

  On 5/26/2020 at 9:32 AM, carolineb said:

E. "Vous pouvez cribler les surnageants des hybridomes par immunotransfert (immunoempreinte), à partir d’un extrait protéique des cellules de la lignée CR". --> VRAI

 

mais l'immunotransfert ne permet pas de cribler les surnageants si?

Expand  

 

Si tu peux le faire tu fais migrer ton extrait antigénique par électrophorèse puis tu déposer ton surnageant dont tu suspectes une affinité avec un ou plusieurs Ag qui ont migré puis tu cribles ce surnageant en utilisant des Ac secondaires marqués :))

 

 

  On 5/26/2020 at 9:32 AM, carolineb said:

D. "La réactivité de l’ACm C avec les cellules normales témoigne d’une erreur expérimentale puisque l’ACm a été produit à partir de la lignée de cellules cancéreuses." FAUX

 

pourquoi c'est faux? l'AcMc a bien été produit à partir de CR non?

Expand  

 

Yup c'est effectivement ce qui est dit dans l'énoncé mais malgré tout, ça ne veut pas dire que la protéine qui a stimulé la synthèse de cet Ac est présente uniquement dans les cellules tumorales, elle peut également l’être dans le tissu sain d’où la possibilité d'une réaction croisée.

 

  On 5/26/2020 at 9:32 AM, carolineb said:

C. "Afin d’obtenir un antigène spécifique des cellules tumorales, vous devrez purifier l’antigène reconnu par C, à partir de la lignée cellulaire CR" FAUX, tjrs pareil je vois pas pourquoi.. CR correspond bien à la lignée dérivée du cancer

Expand  

 

Ben du coup c'est faux oui puisque cet Ac fait une réaction croisée avec les cellules normales, on ne va donc pas obtenir un antigène spécifique des cellules tumorales

 

  On 5/26/2020 at 9:32 AM, carolineb said:

’ACm D peut être écarté d’emblée pour immunoprécipiter l’antigène qu’il reconnaît, à partir des protéines solubles du tissu tumoral". FAUX, étant donné qu'en immunofluorescence indirecte l'ACmD ne reconnait rien pourquoi on ne peut pas l'écarter? 

Expand  

Si justement l'Acm D provoque un signal en immunofluorescence indirecte

[maech]

saluuuut

 

• QCM 15: 

-  D. faux car l'AS reconnait un épitomé non conformationnel (car on est en SDS PAGE) sur la PrPC (animaux saints) ainsi que sur les PrPSC (animaux malade) car tu as des bandes aux deux 

- E. Faux car l'épitoge linéaire est aussi reconnue sur la PrPC de l'animal saint 

 

• QCM 21:

Si tu le peux, tu déposes les Ag pour lesquels tu veux une certaine affinité, tu ajoutes un le surnageant avec des Ac et tu ajoutes des Ac secondaires marqués  

 

• QCM 22: faux car tu ne peux pas être sure que c'est une erreur vu qu'elle reconnait aussi les cellules cancéreuses, tu as plus de probabilité qu'elle reconnaisse un épitomé présent sur les deux et donc moins spécifique ou alors qu'elle fasse une réaction croisé.
• QCM 23:C reconnait les deux cellules tumorales et saines donc il ne sera pas spécifique et ne donnera pas de diagnostic fiable, D lui reconnait quelque chose en immunofluorescence indirecte mais c'est en IT qu'il ne reconnait rien, il reste donc utile et reconnait certainement un épitomé conformationnel 

 

 

[carolineb]

  On 5/26/2020 at 10:13 AM, Metallica said:

Yup c'est effectivement ce qui est dit dans l'énoncé mais malgré tout, ça ne veut pas dire que la protéine qui a stimulé la synthèse de cet Ac est présente uniquement dans les cellules tumorales, elle peut également l’être dans le tissu sain d’où la possibilité d'une réaction croisée.

 

Expand  

 

  On 5/26/2020 at 10:24 AM, maech said:

QCM 22: faux car tu ne peux pas être sure que c'est une erreur vu qu'elle reconnait aussi les cellules cancéreuses, tu as plus de probabilité qu'elle reconnaisse un épitomé présent sur les deux et donc moins spécifique ou alors qu'elle fasse une réaction croisé.

Expand  

 

 et la réaction croisée n'est pas considérée comme une erreur expérimentale? parce que s'il y a une réaction croisée avec des cellules normales c'est que l'échantillon de base en contenait donc  --> erreur expérimentale non? 

 

sinon merci bcppp @Metallica @maech!

 

[Théophylline]

  On 5/27/2020 at 1:40 PM, carolineb said:

et la réaction croisée n'est pas considérée comme une erreur expérimentale? parce que s'il y a une réaction croisée avec des cellules normales c'est que l'échantillon de base en contenait donc  --> erreur expérimentale non?

Expand  

Salut @carolineb ! 

 

Non, c'est pas une erreur expérimentale. On parle d'erreur expérimentale quand la personne qui fait l'expérience fait une erreur de manip, or on peut tout bien faire et avoir des réactions croisées ! Donc ce n'est pas une erreur, c'est juste une conséquence du fait qu'un même épitope peut être présent sur deux protéines différentes (ce qui fait qu'un anticorps peut reconnaître des protéines différentes = réactions croisées). 

[carolineb]

@Théophylline ah d'accord merci beaucoup!