Wonder Posted May 25, 2020 Posted May 25, 2020 (edited) Bonjour, je bloque sur ces différents items, merci !! - https://zupimages.net/viewer.php?id=20/22/3i16.png : je ne comprends pas pourquoi la D est vraie car selon moi la protéine d'intérêt est dans le pic III étant donné que la protéine de fusion a été clivée par la thrombine normalement. En TD le qcm 13 p.11 du poly d'entrainement montre ce même cas de figure et on avait raisonné comme ça. - https://zupimages.net/viewer.php?id=20/22/8va2.png : là j'ai du mal à comprendre pourquoi la C est fausse et la E est vrai alors que rien ne nous indique ca agit sur le réplication de l'ADN ? (début de l'énoncé si jamais : https://zupimages.net/viewer.php?id=20/22/vag6.png ) - CRIPSR-Cas9 est un système de défense des bactéries contre les bactériophages (vrai, quelqu'un pourrait-il confirmer ?) - QCM 23: Dans une maladie auto-immune X, des auto-anticorps présent dans le sérum des patients vont reconnaître la protéine P et l’empêcher d’effectuer sa fonction.A. Pour détecter la présence d’auto-anticorps dans le sérum des patients, on peut effectuer un ELISpot à partir de la protéine purifiée et du sérum de l’individu (faux, certes ELISpot est utilisé pour détecter les cellules sécrétrices d'Ag mais comme me l'a expliqué @Metallica on peut aussi l'utiliser pour mettre en évidence des Ac..) De plus c'est une colle relue par Nogueira alors je ne sais pas trop quoi penser Edited May 26, 2020 by Wonder Quote
LdvMstr Posted May 28, 2020 Posted May 28, 2020 Coucou, Pour le QCM 14, item D : on insère notre extrait protéique dans notre tube contenant des billes de sépharose liée à la GSH, donc il va y avoir interaction GST/GSH (fixation à la colonne), et les protéines non retenues, vont être celles ne portant pas l'étiquette GSH (donc toutes sauf notre protéine de fusion), ensuite, on ajoute la GSH, et obtient notre protéine de fusion étiquetées GST. Donc dans le pic II on retrouve bien notre protéine de fusion, mais celle-ci est étiquetée GST. Si on souhaite avoir que la protéine de fusion, on la retrouvera, en effet, seulement dans le pic III (comme tu l'as dit). Ici, l'item manque de précision car, en effet, on retrouve la protéine de fusion dans le pic II mais celle-ci est étiquetée. Au concours, les items seront clairs, et ce qui est attendu sera énoncé clairement sans laisser de doutes sur la réponse. CRISPR-Cas 9 est en effet un système de défense des bactéries contre les bactériophages (structure observée la première fois chez Escherichia Coli), fonctionnant d'une manière analogue au système ARNi des eucaryotes (cf. Génome). Pour le QCM 18 : Item C, faux : en effet, le PDGF est un facteur de croissance qui va jouer un rôle dans la prolifération cellulaire (cf. énoncé). La prolifération cellulaire nécessite la réplication de l'ADN, donc une augmentation de thymidine. Ainsi, le PDGF ne se lit pas à la thymidine, il permet juste l'augmentation de thymidine afin de permettre la réplication cellulaire. Item E, vrai : en effet, on remarque que l'ajout de PDGF augmente la quantité de thymidine dans la cellule, mettant en évidence la réplication de l'ADN (quand il y a réplication de l'ADN, on augmente nos quantités de thymidine dans la cellule). Quote
LdvMstr Posted May 28, 2020 Posted May 28, 2020 Concernant l'Elispot : il permet de numérer des cellules sécrétrices d'Ac, ou des cellules sécrétrices d'un Antigène à l'aide d'un anticorps. Donc, on ne détecte pas un anticorps, puisqu'on énumère des cellules. Si on veut détecter des anticorps, on utilise un Elisa Indirect. Quote
Wonder Posted May 28, 2020 Author Posted May 28, 2020 (edited) On 5/28/2020 at 5:18 PM, LdvMstr said: Concernant l'Elispot : il permet de numérer des cellules sécrétrices d'Ac, ou des cellules sécrétrices d'un Antigène à l'aide d'un anticorps. Donc, on ne détecte pas un anticorps, puisqu'on énumère des cellules. Si on veut détecter des anticorps, on utilise un Elisa Indirect. Expand Merci beaucoup @LdvMstr, seulement pour ELIspot dans le cours il est bien écrit qu'il peut également servir pour mettre en évidence la présence d'Ac et dans une annale un item du genre était juste : Edited May 28, 2020 by Wonder Quote
LdvMstr Posted May 28, 2020 Posted May 28, 2020 Coucou, Je viens de vérifier dans le cours est il est marqué que l'Elispot permet de mettre en évidence des cellules (types plasmocytes) secrétrices d'Ac. On met des cellules sécrétrices d'Ac en présence d'un antigène, puis les Ac sécrétés vont soit se fixer sur l'antigène, si ils sont spécifique de cette antigène, soit ils ne se fixeront pas. Après lavage de nos puits, seuls les anticorps fixés à nos antigènes (fixés au fond du puits) vont rester. Puis on va détectées ces Ac à l'aide d'un chromogène. Ceci va donner des taches colorées, avec autant de taches que de cellules sécrétrices. Donc ici, on utilise des anticorps pour justifier que des cellules sécrètent des anticorps spécifiques d'un antigènes, mais en aucun cas, on a mis en évidence un dosage des anticorps. De plus, on utilise pas de sérums quand on réalise un Elispot, en effet, on utilise une quantité de cellules connues en suspension dans un milieu de culture. Donc, si on connait les cellules, le but est ici de savoir si elles produisent des Ac spécifique de l'antigènes. En fait, l'objectif est de savoir si il y a une activation et une expansion des lymphocytes spécifiques à un antigène, qui pourraient alors induire une réaction immunitaire à type infection, ou maladie auto-immune. Voilà j'espère que tu as compris, mais l'essentiel à retenir c'est qu'on utilise un Elispot pour détecter et numérer des plasmocytes. Quote
Wonder Posted May 29, 2020 Author Posted May 29, 2020 On 5/28/2020 at 6:47 PM, LdvMstr said: Coucou, Je viens de vérifier dans le cours est il est marqué que l'Elispot permet de mettre en évidence des cellules (types plasmocytes) secrétrices d'Ac. On met des cellules sécrétrices d'Ac en présence d'un antigène, puis les Ac sécrétés vont soit se fixer sur l'antigène, si ils sont spécifique de cette antigène, soit ils ne se fixeront pas. Après lavage de nos puits, seuls les anticorps fixés à nos antigènes (fixés au fond du puits) vont rester. Puis on va détectées ces Ac à l'aide d'un chromogène. Ceci va donner des taches colorées, avec autant de taches que de cellules sécrétrices. Donc ici, on utilise des anticorps pour justifier que des cellules sécrètent des anticorps spécifiques d'un antigènes, mais en aucun cas, on a mis en évidence un dosage des anticorps. De plus, on utilise pas de sérums quand on réalise un Elispot, en effet, on utilise une quantité de cellules connues en suspension dans un milieu de culture. Donc, si on connait les cellules, le but est ici de savoir si elles produisent des Ac spécifique de l'antigènes. En fait, l'objectif est de savoir si il y a une activation et une expansion des lymphocytes spécifiques à un antigène, qui pourraient alors induire une réaction immunitaire à type infection, ou maladie auto-immune. Voilà j'espère que tu as compris, mais l'essentiel à retenir c'est qu'on utilise un Elispot pour détecter et numérer des plasmocytes. Expand Re @LdvMstr merci beaucoup, du coup ELIspot = détection et numération de cellules sécrétrices d'Ac ou alors mise en évidence de la sécrétion d'un Ag en présence d'un Ac ? Donc à chaque fois on énumère des cellules et non des Ac ou des Ag pour lesquels on ne fait que montrer leur présence mais on ne les quantifie pas ? Mais ce qui reste pas clair dans ma tête c'est quand numérant des cellules sécrétrices d'Ac on met donc en évidence le fait qu'il y ai des anticorps quand même ... Quote
LdvMstr Posted May 29, 2020 Posted May 29, 2020 En effet, en numérant des cellules sécrétrices d'anticorps, tu mets également en présence la sécrétion d'anticorps, mais sur un pool de cellules sélectionnées auparavant, dont tu sais déjà qu'elles sécrètent un anticorps dirigé contre un antigène spécifique. En fait, ici le but est de comprendre l'objectif de la méthode utilisée : on cherche à mettre en évidence une sécrétion par des cellules qu'on a sélectionné, pour savoir quelle type de cellules exactes sécrète un anticorps ou un antigène, et le nombre de cellules afin de savoir si il y a une réaction infectieuse ou pas. Quand on réalise un elispot, on sait déjà que notre patient présente des anticorps pour un antigène, le but sera de savoir qu'elles sont les cellules qui les sécrètent et en quelle quantité on retrouve ces cellules. Par exemple, on utilise un Elispot pour énumérer des cellules rares dans le sang. En effet, les techniques habituelles (NFS), ne permettent pas de les détecter, donc on fait un elispot (car on sait qu'elles sont leurs sécrétions), pour savoir qu'elle est la quantité dans les sang de ces cellules, et pour savoir si il y a un déficit ou non de ces cellules. Quote
Wonder Posted May 30, 2020 Author Posted May 30, 2020 On 5/29/2020 at 10:05 AM, LdvMstr said: En effet, en numérant des cellules sécrétrices d'anticorps, tu mets également en présence la sécrétion d'anticorps, mais sur un pool de cellules sélectionnées auparavant, dont tu sais déjà qu'elles sécrètent un anticorps dirigé contre un antigène spécifique. En fait, ici le but est de comprendre l'objectif de la méthode utilisée : on cherche à mettre en évidence une sécrétion par des cellules qu'on a sélectionné, pour savoir quelle type de cellules exactes sécrète un anticorps ou un antigène, et le nombre de cellules afin de savoir si il y a une réaction infectieuse ou pas. Quand on réalise un elispot, on sait déjà que notre patient présente des anticorps pour un antigène, le but sera de savoir qu'elles sont les cellules qui les sécrètent et en quelle quantité on retrouve ces cellules. Par exemple, on utilise un Elispot pour énumérer des cellules rares dans le sang. En effet, les techniques habituelles (NFS), ne permettent pas de les détecter, donc on fait un elispot (car on sait qu'elles sont leurs sécrétions), pour savoir qu'elle est la quantité dans les sang de ces cellules, et pour savoir si il y a un déficit ou non de ces cellules. Expand Ok j'ai tout compris, merci beaucoup!!! Merci d'avoir pris le temps de tout m'expliquer ! @LdvMstr J'ajoute juste une petite question qui m'est venue au lieu de recréer un sujet. Quand dans un énoncé on a des sous unités liées par des liaisons covalentes donc qui peuvent etre réduitent par le béta mercarpto éthanol et des liaisons non covalences réduites par le SDS. Dans le QCM quand y'a écrit SDS en conditions non réductrices = SDS détruit les liaisons non covalentes et non réductrices = sans béta mercapto ? Quote
Solution LdvMstr Posted May 30, 2020 Solution Posted May 30, 2020 Coucou, On utilise le bêta mercaptoéthanol pour réduire les ponts disulfures (qui sont des liaisons covalentes). Quand dans un QCM il y a écrit en conditions réductrices ça veut dire qu'on utilise le bêta mercaptoéthanol (pour réduire les ponts disulfure), ou un autre agent réducteur mais celui-ci sera alors précisé, ainsi que son action sur les liaisons covalentes, dans l'énoncé. Le SDS est un agent dénaturant, donc il détruit les liaisons non covalentes, ainsi il permet de mettre en évidence la structure quaternaire des protéines. On 5/30/2020 at 9:02 AM, Wonder said: Dans le QCM quand y'a écrit SDS en conditions non réductrices = SDS détruit les liaisons non covalentes et non réductrices = sans béta mercapto ? Expand Du coup, oui c'est bien ce qu'il faut comprendre. Quote
Wonder Posted May 30, 2020 Author Posted May 30, 2020 On 5/30/2020 at 9:42 AM, LdvMstr said: Coucou, On utilise le bêta mercaptoéthanol pour réduire les ponts disulfures (qui sont des liaisons covalentes). Quand dans un QCM il y a écrit en conditions réductrices ça veut dire qu'on utilise le bêta mercaptoéthanol (pour réduire les ponts disulfure), ou un autre agent réducteur mais celui-ci sera alors précisé, ainsi que son action sur les liaisons covalentes, dans l'énoncé. Le SDS est un agent dénaturant, donc il détruit les liaisons non covalentes, ainsi il permet de mettre en évidence la structure quaternaire des protéines. Du coup, oui c'est bien ce qu'il faut comprendre. Expand MERCI ENCORE Quote
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