Jump to content

Recommended Posts

Posted

Salut! 

Je viens de tilter que je ne "comprenais" pas l'action de la néomycine lors d'une recombinaison homologue.

C'est un antibio. Comment peut-il provoquer la mort des CES n'ayant pas intégré le gène Neo ? 

Merci !

Posted (edited)
  On 5/25/2020 at 10:44 AM, Le-Roi-des-Glaces said:

Salut! 

Je viens de tilter que je ne "comprenais" pas l'action de la néomycine lors d'une recombinaison homologue.

C'est un antibio. Comment peut-il provoquer la mort des CES n'ayant pas intégré le gène Neo ? 

Merci !

Expand  

salut,

le gène néo est enfait un gène de résistance à cet antibio donc les bactéries ayant acceptée le vecteur et donc le gène néo seront résistante à l'antibio, c'est un exemple de sélection positive 

dis-moi si c'est clair sinon j'explicite 😅

Edited by Lemillion
Posted

Re ! 

Le bémol, c'est qu'on taffe pas sur des bactéries mais sur les CES, non? 

Si je reprends l'ordre des diapos:

- n°14 -> recombinaison homo / non homo avec obtention d'un génome murin de la CES recombinante

- n°15 -> sélection positive (néo) + sélection négative (ganci) 

De ce que j'en avais compris, c'est sur tes CES potentiellement recombinantes (homo ou non) que tu fais agir ta néo et ton ganci...

Le rôle d'un antibio, c'est de victimiser des bactéries, pas des cellules; enfin , je crois ..? 

Dis moi ce que t'en penses 🙂 

Posted
  On 5/25/2020 at 11:53 AM, Le-Roi-des-Glaces said:

Re ! 

Le bémol, c'est qu'on taffe pas sur des bactéries mais sur les CES, non? 

Si je reprends l'ordre des diapos:

- n°14 -> recombinaison homo / non homo avec obtention d'un génome murin de la CES recombinante

- n°15 -> sélection positive (néo) + sélection négative (ganci) 

De ce que j'en avais compris, c'est sur tes CES potentiellement recombinantes (homo ou non) que tu fais agir ta néo et ton ganci...

Le rôle d'un antibio, c'est de victimiser des bactéries, pas des cellules; enfin , je crois ..? 

Dis moi ce que t'en penses 🙂 

Expand  

je crois que la recherche maraichers diffère quelque peu de la recherche rangueil 😅

je vais laisser quelqu'un de plus qualifié répondre 

Posted (edited)

Coucou!

 

Alors en fait, tout dépend le type de promoteur que tu as devant le gène.

La plupart du temps, on utilise un gène de résistance à l'ampicilline chez les bactéries, et tu remarques que le promoteur devant ce gène est procaryote.

Mais tu peux très bien faire de la sélection chez des cellules eucaryotes à condition qu'il y ait un promoteur eucaryote devant le gène de résistance (à la néomycine par exemple).

 

Après je sais que ça peut paraitre perturbant d'utiliser des antibio sur des cellules eucaryotes. Mais pourtant c'est ce qui se passe dans l'exemple du cours.

Je peux pas te dire pourquoi ça marche et comment ça marche... Mais ça marche!

Edited by enerys4
  • Ancien Responsable Matière
  • Solution
Posted

alors pour la sélection positive : néomycine qui va avoir comme les autres ATB utilisés contre les cellules eucaryotes un effet cytotoxique (comme la généticine qui inhibe la synthèse protéiques), donc mort des cellules qui n'ont pas intégré la résistance

sélection négative : il faut l'absence du gène TK (ie avoir fait une RH), car le gène TK permet de triphosphoryler le ganciclovir (anti-viral utilisé contre les herpès virus), qui devient cytoxiqu en s'intégrant dans l'ADN, bloquant la réplication

 

est-ce plus clair ?

Posted

@Lemillion C'est l'intention qui compte mdr

@enerys4 Ca marche ! merci 🙂 

  On 5/25/2020 at 12:06 PM, enerys4 said:

Après je sais que ça peut paraitre perturbant d'utiliser des antibio sur des cellules eucaryotes. Mais pourtant c'est ce qui se passe dans l'exemple du cours.

Je peux pas te dire pourquoi ça marche et comment ça marche... Mais ça marche

Expand  

@Hypnos AHHHH ! Je savais pas pour l'effet cytotoxique des ATB 😮 Cimer ! 

 

Merci à vous ! 

  • Ancien Responsable Matière
Posted
  On 5/25/2020 at 1:01 PM, Le-Roi-des-Glaces said:

ATB

Expand  

Ensuite attention, ce n’est que quelques cas (sinon on décimerait plus qu’on soignerait d’une infection bacterienne), rares sont les ATB avec cytotoxicité eucaryote !

 

on utilise le G418 (généticine) qui vis les ribosome en partie mais qui va avoir une affinité différentes entre bactéries et cellules humaines (mais ça sera pour un autre jour 😅)  

Join the conversation

You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.

Guest
Reply to this topic...

×   Pasted as rich text.   Paste as plain text instead

  Only 75 emoji are allowed.

×   Your link has been automatically embedded.   Display as a link instead

×   Your previous content has been restored.   Clear editor

×   You cannot paste images directly. Upload or insert images from URL.

  • Recently Browsing   0 members

    • No registered users viewing this page.
×
×
  • Create New...