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  • Ancien Responsable Matière
Posted

Bonjour ! 

 

Cette question à déjà été posée mais je n'ai pas eu la réponse à cette question

 

Dans le cours du Pr Montferrand, il est dit à propos du système KO

 

  Citation

Introduction dans le zygote (et pas dans les cellules ES)

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Déjà, qu'est qu'on introduit précisément ? Et cela contredit le cours de Bettina qui dit que cela se fait dans les ES justement ? 

 

Même question pour le KI, qu'en est-il ? 

 

Merci à vous d'avance !

 

Posted

pour faire un KO on introduit le plasmide  qui contient les élément nécessaire au crispr/cas9 (tu as le détails dans les diapos) et il ne faut pas que tu confondes la technique de crispr et la technique de recombinaison homologue classique (sans crispr) 😕

 

pour résumer un ancien message du Pr.Montferrand "A votre question, est-il possible d'obtenir des modèles KO par recombinaison homologue ?

Je répondrai: Vrai pour la transgenèse classique (c'est à dire sans CRISPR Cas9) et faux pour la transgenèse où l'on utilise CRISPR Cas9."

donc il faut faire attention quand on parle de faire des KO car on peut faire soit avec la RH classique, remplacer par un gène qui ne code pour rien, mais on ne peut pas faire ça avec crispr ou alors c'est du crispr mais sans RH donc avec de la RNH (cela veut dire qu'on insère que le système crispr et pas de séquence de gène en plus)

 

ensuite la technique de crispr peut se faire dans n'importe quelles cellules nuclées donc non ça ne contredit pas le cours de Bettina😉

on l'utilise préférentiellement dans des zygotes pour avoir le génome d'un individu modifié entièrement et pas chimérique 

 

pour le KI 

avec la RH classique c'est sur ES et crispr on fait sur zygote avec le système crispr + la séquence du gène qu'on veut mettre à la place  🙂

 

 

  • Ancien Responsable Matière
Posted

salut 

 

je rajoute juste un détail sur le nécessaire à introduire selon moi pour CRISPER-Cas9

 

Pour les KO :

- un plasmide avec la Cas9

- soit des plasmides permettant l'expression d'ARN guides (1 ou 2 en fonction de si on le veut simple ou double), soit directement on transfecte des ARN guides déjà synthétisés

 

pour le KI :

- un plasmide avec la cas9

- un plasmide avec la séquence d'intérêt 

- soit un plasmide permettant l'expression de l'ARN guide, soit transfection direct d'ARN guide

 

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