Préparation de cellules

[Benj152]

Salut, 

Dans le cas "d'isolement d'une population cellulaire porteuse d'un Ag membranaire spécifique (là où on fixe des Ac ou Ag sur plaque ou bien avec des billes magnétiques) 

J'ai parfois un doute sur cette technique, est ce que quelqu'un peut m'expliquer l'intérêt de cette technique ? 

 

De ce que j'ai compris il y a les cellules fixées et les autres non fixées (sélection négative). Mais du coup est-ce qu'on utilise cette technique pour "purifier" ou "isoler" seulement les cellules non fixées ? 

[justineb]

Salut @Benj152! 

L’intérêt de cette technique est de séparer une population cellulaire particulière grâce au principe de complémentarité Ag-Ac. En effet, les billes magnétiques sont revêtues soit d’Ac complémentaires avec un Ag qui est spécifiquement présent sur les cellules que tu veux isoler, soit elle seront revêtues d’Ag complémentaires à des Ac que tu souhaites isoler. 
Ainsi, soit tu peux t’en servir pour isoler une population cellulaire ou un Ac qui t’intéresse, soit tu peux purifier une suspension hétérogène en éliminant les cellules ou les Ac qui ne t’intéressent pas après leur fixation. 

C’est plus clair pour toi? 

[Benj152]

@justineb Salut! Merci pour ta réponse 

En faite c'est pas encore complètement clair .. 

J'ai le schéma en tête (vers les dernières pages du poly jsp si tu vois lequel), où effectivement y'a une complémentarité Ag-Ac ou Ac-Ag 

Mais à partir de la on a donc une catégorie spécifique d'Ag ou Ac fixé et le reste qui part 

Et du coup par rapport à ce que tu m'as répondu, là c'est lesquels qu'on isole ? Parce que pour celles fixées je sais que la prof a dit que c'était galère de les récupérer pcqu'il fallait un peu forcer pour les defixer et que ça leur causerait des dommages.

Et par rapport aux cellules non-fixées, est ce qu'on peut dire qu'on les "isole" (parce que ce peut-être un mélange de plusieurs cellules non ?) ?

 

Et dans le cas pour purifier une suspension hétérogène, les cellules ou Ac qu'on élimine resteront donc sur la plaque de microtitration (ou les billes suivant la méthode) ; Le reste non fixé sera donc le mélange purifié ? 

 

Oulala j'espere que tu comprendras mes questions, et que je complique pas les choses ^^

 

[justineb]

il y a 25 minutes, Benj152 a dit :

Et du coup par rapport à ce que tu m'as répondu, là c'est lesquels qu'on isole ? Parce que pour celles fixées je sais que la prof a dit que c'était galère de les récupérer pcqu'il fallait un peu forcer pour les defixer et que ça leur causerait des dommages.

Oui c’est vrai que cela peut entraîner des dommages sur les cellules qui se sont fixées c’est pour cela que l’on a plus tendance à faire l’inverse, c’est à dire d’utiliser les billes pour éliminer les cellules que l’on ne veut pas. Autrement dit on isole les cellules que l’on ne veut pas pour garder que celles qui nous intéressent.

 

il y a 34 minutes, Benj152 a dit :

Et par rapport aux cellules non-fixées, est ce qu'on peut dire qu'on les "isole" (parce que ce peut-être un mélange de plusieurs cellules non ?) ?

Je pense qu’on dit plutôt qu’on isole les cellules porteuses de l’Ag dont on veut se débarrasser et qu’on va donc purifier le mélange de cellules non fixées grâce à cet isolement.
 

il y a 35 minutes, Benj152 a dit :

Et dans le cas pour purifier une suspension hétérogène, les cellules ou Ac qu'on élimine resteront donc sur la plaque de microtitration (ou les billes suivant la méthode) ; Le reste non fixé sera donc le mélange purifié ? 

Oui c’est ça tu purifies ta solution en éliminant la population que tu ne veux pas à l’aide de la plaque de microtitration ou des billes magnétiques.

[Benj152]

@justineb

Ok c'est tout clair, merci!