minuscortex Posted May 18, 2020 Posted May 18, 2020 Bonjour ! J'ai toujours du mal à vraiment différencier ces deux méthodes : immunoprécipitation / chromato d'affinité. J'ai l'impression que dans les deux cas, on fait passer un extrait protéique qui sera ou non retenu sur la colonne en fonction de son affinité pour l'Ac couplé à la protéine A. Ensuite c'est l'utilisation qu'on fait de ces résultats qui divergent ? bonne soirée ! Quote
Solution Metallica Posted May 18, 2020 Solution Posted May 18, 2020 Coucou Pour l'immunoprécipitation, je te propose ce sujet qui en parle pas mal : Et pour il y a une heure, minuscortex a dit : chromato d'affinité contrairement à l'immunoprecipitation tu ne cherche pas à faire précipiter un complexe (Ag+Ac+bille +protéine A) au fond d'un tube pour l'isoler mais plutôt à retenir les molécules de ton extrait protéique qui sont reconnues par les molécules que tu as préalablement fixées sur ta colonne. Dans les 2 cas on isole un Ag (ou plusieurs dans le cas d'une co-immunoprécipitation) mais contrairement à la chromato d'affinité qui a pour finalité la purification d'un ag , l'immunoprecipitation n'utilise cette "purification" que pour étudier les caractéristiques de l'Ag et de l'Ac qui ont permis l'experience. ça te va ou c'est pas clair :))? Quote
minuscortex Posted May 18, 2020 Author Posted May 18, 2020 yes yes yes ! merci beaucoup ! @Metallica en chromato en ne purifie pas forcément uniquement des Ag ? on pourrait purifier des cellules entières qui ont des Ag membranaires ? ou des Ac si les Ag sont sur la phase solide ? Quote
Metallica Posted May 18, 2020 Posted May 18, 2020 (edited) il y a une heure, minuscortex a dit : ou des Ac si les Ag sont sur la phase solide ? Ouaip tout à fait il y a une heure, minuscortex a dit : on pourrait purifier des cellules entières qui ont des Ag membranaires je pense que ça se cantonne à l'échelle moléculaire parce que ça doit être assez difficile de retenir des cellules entieres avec quelques molécules adsorbées .. Edited May 18, 2020 by Metallica Quote
minuscortex Posted May 18, 2020 Author Posted May 18, 2020 ok merci ! @Metallica euh... en fait j'ai encore une question ! Quand on Co-immunoprécipite, avant de faire la révélation par SDS page il faut bien faire un lavage pour éliminer toutes les autres protéines qui n'ont pas eu d'affinité pour l'Ac. Sinon, si on a un signal avec un Ac anti prot B et un autre anti prot C, on ne pourrait pas affirmer qu'elles étaient en intéraction ? Je ne sais pas s'il le précise dans les énoncés ou si ça peut être un piège ! Quote
Metallica Posted May 18, 2020 Posted May 18, 2020 (edited) il y a une heure, minuscortex a dit : Quand on Co-immunoprécipite, avant de faire la révélation par SDS page il faut bien faire un lavage pour éliminer toutes les autres protéines qui n'ont pas eu d'affinité pour l'Ac. Sinon, si on a un signal avec un Ac anti prot B et un autre anti prot C, on ne pourrait pas affirmer qu'elles étaient en intéraction ? Absolument oui si on ne se débarassait pas du "surnageant" il pourrait y avoir une réaction croisée (avec les Ac permettant la révélation) qui pourrait nous faire croire à tort que plein de prots interagissaient initialement Edited May 18, 2020 by Metallica Quote
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