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salut !

concernant le QCM 2 du CCB pour l'item : D. Les cellules transformées peuvent être sélectionnées par l'ampicilline. (VRAI)

c'est donc vrai puisque transformé s'utilise pr des cellules procaryotes et que le gène de résistance à l'ampicilline est placé après un promoteur procaryote.

Or je ne suis pas sûre de comprendre : est ce que les cellules eucaryotes pourront aussi être sélecitonnées par l'ampicilline ? donc si l'item était : ."Les cellules transfectées peuvent être sélectionnées par l'ampicilline" , serait'-il compté vrai?     merci !

et à y être j'ai pas compris le 3D : Il suffit de lyser les cellules pour récupérer l'insuline recombinante utilisable.

Posted (edited)

*antibiotique 

et pour la 3D j'ai pas le sujet sous les yeux mais il me semble qu'il n'y a pas besoin de lyser les cellules car il y a une séquence de sécrétion il me semble non ?

 

Edited by foramen
Posted

oui c'est ca, la correction est : Il y a une séquence signal de sécrétion entre l'ATG et l'ADNc de l'insuline, l'insuline recombinante sera donc directement dans le surnageant des cellules.

mais comment sait-on que cette séquence signal de sécrétion "enverra" l'insuline dans le surnageant ??

Posted

@exosquelette parce que c'est le rôle de cette séquence en gros c'est comme au S1 la séquence de sécrétion va envoyer la protéine en cours de synthèse au REG puis transiter jusqu'a la membrane ou elle sera sécrétée ; et qu'est ce qu'il y a de l'autre coté de la MP ? le surnageant de culture tout simplement on aura plus qu'a récolter l'insuline et voila !

 

je te renvoie a la partie du cours "Extraction et purification de protéines recombinantes"

  • Solution
Posted

Je viens faire un petit résumé pour que ce soit plus simple (si ça vous dérange pas).

Mais @foramen, tes réponses sont justes! Merci 😁

 

Souvent dans les exercices, vous avez un vecteur avec un gène de résistance à un antibiotique et promoteur procaryote. Cela signifie que seules les cellules procaryotes ayant intégré le vecteur vont pouvoir résister à l'antibiotique.

Par contre, si tu transfectes des cellules eucaryotes avec ce vecteur, elles ne pourront pas activer ce gène de résistance car elles ne savent pas comment utiliser un promoteur procaryote. Donc tes cellules eucaryotes vont mourir.

 

Ensuite, les séquences de sécrétion sont toujours utilisées pour sécréter les protéines dans le surnageant (donc en dehors de la cellule). C'est quelque chose qu'il faut savoir 😉

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