qcm vecteur TAT

[carolineb]

Salut!

 

QCM V2 : Lors de la construction de ce plasmide on effectue une électrophorèse (qui permet de vérifier la taille des fragments) après linéarisation.
A. On observe trois bandes principales de 1 ; 5 et 6kb --> VRAI

 

Ici je ne vois pas comment on peut observer une bande de 5kb correspondant au plasmide seul 

en fait c'est seulement quand on utilise une sonde spécifique de l'ADN génomique que les seules bandes observables sont celles de 1 et 6kb?  

 

 

QCM V7 : On dispose d’un insert contenant un gène d'intérêt que l’on souhaite cloner, d’un plasmide et d’une culture de bactéries. Seuls les sites de coupures uniques pour les enzymes de restriction de type II sont notés sur les schémas suivants. Les sites de coupures reconnus par les enzymes de restriction de type II sont notés selon les conventions usuelles.

D. Les bactéries de couleur bleue en présence de X-galactose possèdent un plasmide recombinant. --> VRAI
 

Quand le plasmide est recombinant les bactéries sont blanches non? 

 

et dans mon cours j'ai noté que : 

"si le vecteur n'a pas pu s'insérer alors les bactéries seront sensibles et blanches", mais du coup c'est dans le cas où les bactéries ne produisent pas naturellement de la B galactosidase et qu'elles n'en produisent que si le gène lac Z (apporté par le plasmide) n'est pas inactivé c'est bien ça?

 

merci d'avance!

 

[Luciolette]

Coucou !

 

QCM V2 : en effet cela dépend de comment tu révèle ton électrophorèse car il est parfaitement possible d'avoir des vecteurs qui ne sont pas parvenus à intégrer l'insert, cela explique la bande de 5Kb. On ne te précise pas comment on a révélé cette électrophorèse, il est vrai que l'on a pu utiliser une sonde mais aussi simplement un agent intercalant.

 

QCM V7 : Alors pour cette question en effet il faut faire attention. Ici, le gène Lac Z est porté par ton insert et donc si utilise une des enzymes NcoI ou Acc651, il sera inséré dans ton plasmide et pourra alors s'exprimer. Dans ce cas les bactéries bleues possèderont bien un plasmide recombinant.

Alors que d'habitude, le gène Lac Z porte les sites de restrictions des enzymes, ainsi lorsque l'insert s'intègre, il "coupe" le gène en deux et empêche son expression donc dans ce cas les bactéries portant des plasmides recombinants sont bien blanches.

Es ce que tu comprends la différence ?

 

Si tu as d'autres questions n'hésites pas, bon courage !

[carolineb]

@Luciolette oui je crois que j'ai saisi la différence merci!

en fait ici les enzymes coupent l'insert avant le gène Lac Z donc il est bien actif et le plasmide recombinant donnera des colonies bleues

alors que si l'enzyme de restriction coupe lac Z en deux il ne codera pas pour la B galactosidase --> pas de réaction avec X-gal donc --> bactéries blanches

c'est bien ça? 

 

 

 

[Luciolette]

@carolineb oui voilà c'est exactement ça !

Généralement le lac Z est porté par le vecteur et pas par l'insert, mais du coup il faut réfléchir à chaque fois si le gène pourra s'exprimer ou pas et donc on trouve ainsi la couleur des colonies.

[carolineb]

@Luciolette niquel merci beaucoup!