Paupauu Posted May 16, 2020 Posted May 16, 2020 bonjour, concernant le QCM suivant : Des chercheurs veulent créer des cellules pluripotentes À partir de cellules adultes. Pour cela ils vont transférer des cellules adultes humaines (quatre types cellulaires différents A, B, C, D) avec un vecteur véhiculant les gènes codant les facteurs de transcription α et β. Après 48 heures de transfection des cellules les chercheurs ont évaluer l'expression des deux gènes par RT PCR puis western Blot. Les résultats sont présentés ci-dessous (voir PJ) je ne comprend pas les items C et D, tous deux comptés vrais C : les cellules A, B et D ont été transfectées efficacement D : en utilisant un vecteur viral intégratif, les chercheurs devraient obtenir le même résultat sur un western Blot réaliser deux mois poste modification génique merci d'avance ! Quote
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 16, 2020 Ancien Responsable Matière Posted May 16, 2020 @uap_brt salut ! C- Il faut regarder le WB pour voir si la transfection a été faite. Ce qui est le cas, la RT PCR sert à voir l'expression des gènes. D- Si le vecteur viral est intégratif, les cellules sont transferctés "à vie" donc les résultats aujourd'hui, demain ou dans 2 mois doivent être pareils. Quote
Paupauu Posted May 16, 2020 Author Posted May 16, 2020 On 5/16/2020 at 4:18 PM, LAmi_Omelette said: @uap_brt salut ! C- Il faut regarder le WB pour voir si la transfection a été faite. Ce qui est le cas, la RT PCR sert à voir l'expression des gènes. D- Si le vecteur viral est intégratif, les cellules sont transferctés "à vie" donc les résultats aujourd'hui, demain ou dans 2 mois doivent être pareils. Expand je comprend absolument pas où on voit sur le WB que la transfection a été faite pour B et D il n'y a aucune bande .. Quote
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 16, 2020 Ancien Responsable Matière Posted May 16, 2020 On 5/16/2020 at 4:20 PM, uap_brt said: je comprend absolument pas où on voit sur le WB que la transfection a été faite pour B et D il n'y a aucune bande .. Expand Mea Culpa j'ai lu actine Quote
Solution enerys4 Posted May 17, 2020 Solution Posted May 17, 2020 Coucou! On 5/16/2020 at 4:11 PM, uap_brt said: C : les cellules A, B et D ont été transfectées efficacement Expand Il suffit, ici, de regarder la figure RT-PCR. On te dit dans la consigne qu'on transfecte un vecteur avec les gènes codant à la fois pour les facteurs de transcirption apha et béta (un vecteur contient les deux gènes). Si tu regardes les colonnes A, B et D, tu remarques qu'elles ont bien au moins un des deux gène exprimés. Il ne faut pas oublier que tu es dans une RT-PCR. Donc tu regardes ici quels ARN sont faits à partir de ton vecteur. Pour A, tu as les deux ARN qui sont transcrits. Pour B, uniquement alpha. Et pour D, les deux sont transcrits mais en plus grande quantité pour alpha. Donc ces cellules ont bien le vecteur car elles expriment au moins un des deux gènes retrouvés dans le vecteur. Je suis d'accord qu'il faut faire un peu de gymnastique cérébrale pour cet exercice... Et pour C, tu ne peux rien dire. Peut-être qu'elle a bien le vecteur mais que rien n'est transcrit. Ou alors, elle n'a pas du tout le vecteur. On 5/16/2020 at 4:11 PM, uap_brt said: D : en utilisant un vecteur viral intégratif, les chercheurs devraient obtenir le même résultat sur un western Blot réaliser deux mois poste modification génique Expand Pour cet item, je suis d'accord avec la justification de @LAmi_Omelette. Si une cellule a été transfectée par un vecteur viral intégratif, elle est censée garder ce vecteur et donc continuer d'exprimer le gène de manière identique tout au long de sa vie. Est-ce que c'est clair? J'espère que mon explication ne fait pas trop fouilli fouilla... Quote
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 17, 2020 Ancien Responsable Matière Posted May 17, 2020 On 5/17/2020 at 7:58 AM, enerys4 said: Tu remarques qu'elles ont bien au moins un des deux gène exprimés. Expand Salut ! Un des deux seulement suffit ? Quote
enerys4 Posted May 17, 2020 Posted May 17, 2020 Comme tu as un vecteur avec les deux gènes à l'intérieur, oui l'expression d'un des deux ARN suffit. Imagine, tu as un vecteur avec deux gènes à l'intérieur. Tu le transfectes à une cellule. Tu es sûr que la transfection a marché si la cellule exprime au moins un des deux gènes du vecteur. Ça parait peut-être bizarre sur le coup, mais en y réfléchissant bien, c'est hyper logique. Quote
Paupauu Posted May 17, 2020 Author Posted May 17, 2020 (edited) On 5/17/2020 at 7:58 AM, enerys4 said: Est-ce que c'est clair? J'espère que mon explication ne fait pas trop fouilli fouilla... Expand Si je comprends bien, si on a au moins un gène qui s'exprime, on est sûr que la cellule est correctement transfectée c'est ça ? par exemple pour la B, ça veut juste dire que pour une raison quelconque le gène β n'est pas transcrit ? et pour la C ça peut très bien être transfert correctement mais rien ne s'exprime, comme ça pourrait ne pas être transfecté, j'ai bon ? du coup, la RT PCR, elle permet de voir la transcription, et le WB l'expression en protéines c'est ça ? pour la D comme j'avais absolument pas compris quelles cellules étaient ou non transfectées je pense que c'est ça qui m'a embrouillé Edited May 17, 2020 by uap_brt Quote
enerys4 Posted May 18, 2020 Posted May 18, 2020 On 5/17/2020 at 9:15 AM, uap_brt said: Si je comprends bien, si on a au moins un gène qui s'exprime, on est sûr que la cellule est correctement transfectée c'est ça ? Expand Oui c'est bien ça! On 5/17/2020 at 9:15 AM, uap_brt said: par exemple pour la B, ça veut juste dire que pour une raison quelconque le gène β n'est pas transcrit ? Expand Oui voilà! Tu sais que tu as le même ADN dans toutes tes cellules nuclées de ton organisme. Pourtant, elles n'expriment pas toutes les mêmes gênes. Là, c'est exactement pareil. Tu insères le même vecteur dans les cellules, mais elles ne vont pas forcément transcrire les mêmes gênes. On 5/17/2020 at 9:15 AM, uap_brt said: et pour la C ça peut très bien être transfert correctement mais rien ne s'exprime, comme ça pourrait ne pas être transfecté, j'ai bon ? Expand Oui c'est tout à fait ça! On 5/17/2020 at 9:15 AM, uap_brt said: du coup, la RT PCR, elle permet de voir la transcription, et le WB l'expression en protéines c'est ça ? Expand Oui c'est ça! On 5/17/2020 at 9:15 AM, uap_brt said: pour la D comme j'avais absolument pas compris quelles cellules étaient ou non transfectées je pense que c'est ça qui m'a embrouillé Expand Le principal, c'est que t'es compris maintenant! Moi aussi il m'a fallu un petit temps avant de tout comprendre. Mais une fois qu'on a toutes les clés pour réussir, ça parait soudainement plus clair Quote
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