OxyGenS Posted May 12, 2020 Posted May 12, 2020 Re, 1) Quand on veut par exemple voir si notre patient a la polyarthrite rhumatoïde, on va prendre de la filaggrine (en prenant un extrait de mb synoviale ?) qu'on met sur la mb et par dessus on y ajoute le sérum du patient. On lave et on révèle avec des Ac 2ndr dirigés contre les Ac anti-filaggrine ? Est-ce que j'ai dit les bonnes étapes svp ? 2) Est-ce que le western blot de manière général est semi-quantitatif ou il ne l'est que dans le cas de détection de maladies auto-immunes ? 3) Avec le western blot, on ne fait que tester des Ac par rapport à un Ag et pas l'inverse ? 4) J'ai pas bien compris les étapes du dot blotting et pq il est semi-quantitatif ? 5) Pour le dot blot, ça ne se fait que dans un sens : on met un Ag et on met un Ac dont on sait qu'il reconnait l'Ag qu'on cherche puis on met un Ac 2ndr qui reconnait l'Ac primaire ? 6) Le dot blot se faisant sur une mb comment on fait pour avoir des sortes de puits comme sur l'image ? https://zupimages.net/viewer.php?id=20/20/x7fr.png Merci Quote
Solution Metallica Posted May 12, 2020 Solution Posted May 12, 2020 Salut il y a 59 minutes, OxyGenS a dit : Quand on veut par exemple voir si notre patient a la polyarthrite rhumatoïde, on va prendre de la filaggrine (en prenant un extrait de mb synoviale ?) qu'on met sur la mb et par dessus on y ajoute le sérum du patient. On lave et on révèle avec des Ac 2ndr dirigés contre les Ac anti-filaggrine ? Ouaip il y a 59 minutes, OxyGenS a dit : 2) Est-ce que le western blot de manière général est semi-quantitatif ou il ne l'est que dans le cas de détection de maladies auto-immunes ? Il l'est tout le temps il y a une heure, OxyGenS a dit : 3) Avec le western blot, on ne fait que tester des Ac par rapport à un Ag et pas l'inverse ? Ben l'intérêt du western blot c est que tu as des bandes pouvant t indiquer si les Ac que tu utilises sont bien spécifiques de Ag qu ils sont censés reconnaître du coup quand tu fais l'etape inverse tu perds cet avantage (les Ig ayant un Pm relativement similaire) et tu ne cibles plus rien il y a une heure, OxyGenS a dit : J'ai pas bien compris les étapes du dot blotting et pq il est semi-quantitatif ? La seule diff avec le WB c est qu ici tu ne fais rien migrer, mais comme pour l autre technique, tu as des bandes (d'ou le blot) dont l'epaisseur donne un ordre d'idee de la quantité d'espece révélée mais ne representant pas une source exacte de mesure d'où le semi quantitatif. il y a une heure, OxyGenS a dit : Pour le dot blot, ça ne se fait que dans un sens : on met un Ag et on met un Ac dont on sait qu'il reconnait l'Ag qu'on cherche puis on met un Ac 2ndr qui reconnait l'Ac primaire ? L'immunodetection se fait comme pour le WB oui. il y a une heure, OxyGenS a dit : ) Le dot blot se faisant sur une mb comment on fait pour avoir des sortes de puits comme sur l'image Je sais pas si on peut parler de puits mais cet aspect circulaire s'obtient parce qu'on dépose une goutte de solution protéique (qui ne migrera pas du coup) Quote
OxyGenS Posted May 12, 2020 Author Posted May 12, 2020 il y a 44 minutes, Metallica a dit : Il y a 1 heure, OxyGenS a dit : Quand on veut par exemple voir si notre patient a la polyarthrite rhumatoïde, on va prendre de la filaggrine (en prenant un extrait de mb synoviale ?) qu'on met sur la mb et par dessus on y ajoute le sérum du patient. On lave et on révèle avec des Ac 2ndr dirigés contre les Ac anti-filaggrine ? Ouaip Tu peux confirmer qu'on prend bien de la mb synoviale stp ? il y a 51 minutes, Metallica a dit : Il y a 2 heures, OxyGenS a dit : J'ai pas bien compris les étapes du dot blotting et pq il est semi-quantitatif ? La seule diff avec le WB c est qu ici tu ne fais rien migrer, mais comme pour l autre technique, tu as des bandes (d'ou le blot) dont l'epaisseur donne un ordre d'idee de la quantité d'espece révélée mais ne representant pas une source exacte de mesure d'où le semi quantitatif. On voit réellement l'épaisseur ou c'est la couleur qui sera plus ou moins foncée qui va nous indiquer la qte d'espèce ? Du coup on va voir si au niv de telle goutte de l'extrait protéique on a bcp d'Ag qui présentent l'épitope reconnu par l'Ac primaire déposé sur la mb ? Puisqu'on ne fait pas migrer, on ne met pas de SDS donc les protéines ne sont pas dénaturées et donc les épitopes conformationnels peuvent être reconnus ? il y a 50 minutes, Metallica a dit : Il y a 2 heures, OxyGenS a dit : ) Le dot blot se faisant sur une mb comment on fait pour avoir des sortes de puits comme sur l'image Je sais pas si on peut parler de puits mais cet aspect circulaire s'obtient parce qu'on dépose une goutte de solution protéique (qui ne migrera pas du coup) Mais quand on va laver pour enlever les Ac primaires qui ne se sont pas fixés, on ne risque pas de tout mélanger ? Est-ce que les protéines qui sont déposées sur la mb s'accrochent à celle-ci y compris pour le WB ? Quote
Metallica Posted May 12, 2020 Posted May 12, 2020 (edited) il y a 32 minutes, OxyGenS a dit : Tu peux confirmer qu'on prend bien de la mb synoviale stp ? Pour cette maladie oui il y a 32 minutes, OxyGenS a dit : On voit réellement l'épaisseur ou c'est la couleur qui sera plus ou moins foncée qui va nous indiquer la qte d'espèce ? Oui tu as raison c est ça on n a pas de bande pardon c'est l intensité du signal qui donne un ordre d'idée ( blot c'était plutôt dans le sens tache je me suis mal exprimée) il y a 32 minutes, OxyGenS a dit : Du coup on va voir si au niv de telle goutte de l'extrait protéique on a bcp d'Ag qui présentent l'épitope reconnu par l'Ac primaire déposé sur la mb Yup ;)) il y a 32 minutes, OxyGenS a dit : Puisqu'on ne fait pas migrer, on ne met pas de SDS donc les protéines ne sont pas dénaturées et donc les épitopes conformationnels peuvent être reconnus Tout à fait il y a 32 minutes, OxyGenS a dit : Mais quand on va laver pour enlever les Ac primaires qui ne se sont pas fixés, on ne risque pas de tout mélanger ? Pourquoi ça se melangerait ? il y a 32 minutes, OxyGenS a dit : Est-ce que les protéines qui sont déposées sur la mb s'accrochent à celle-ci y compris pour le WB Ouaip sinon ça serait assez embêtant puisque t'aurais plus rien à observer à la fin x) Edited May 12, 2020 by Metallica Quote
OxyGenS Posted May 12, 2020 Author Posted May 12, 2020 il y a 42 minutes, Metallica a dit : Pourquoi ça se melangerait ? Jsp c'était confus dans ma tête mais avec la réponse suivante c'est bon j'ai compris Merci bcp c'est plus clair mtn ! Quote
OxyGenS Posted May 12, 2020 Author Posted May 12, 2020 @Metallica Une ptite question en plus si ça te dérange pas : Pour le WB et le dot blotting, dans le poly ils sont classés avec les méthodes qualitatives mais sont semi-quantitatifs. Est-ce que c'est une "sous-catégorie" des méthodes qualitatives ? Est-ce qu'en QCM si on a "le WB et dot blotting sont des méthodes qualitatives", on compte vrai ou faux stp ? Quote
Metallica Posted May 12, 2020 Posted May 12, 2020 il y a 1 minute, OxyGenS a dit : our le WB et le dot blotting, dans le poly ils sont classés avec les méthodes qualitatives mais sont semi-quantitatifs. Est-ce que c'est une "sous-catégorie" des méthodes qualitatives ? En fait le semi-quantitatif c'est quelque chose de "secondaire" dans ces techniques, le but principal étant la révélation des interactions entre Ac-Ag (qualitatif donc) il y a 3 minutes, OxyGenS a dit : le WB et dot blotting sont des méthodes qualitatives", on compte vrai ou faux Vrai du coup (c'est ce qui est marqué dans le cours faut par chercher trop loin) Quote
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