pharmacométrie QCM

[Angelep]

Bonjour, je ne comprends pas bien ces items 

 

Système BRET avec GFP sur gamma et luciférase sur alpha sur un récepteur Mu opiacé: 

D- Si une molécule X determine une augmentation du signal BRET, on peut affirmer qu'il s'agit d'un agoniste inverse VRAI 

 

Je ne comprend pas tres bien les agonistes inverses, ils suppriment l'activité constitutive non ? Pas l'effet de l'activation de la protéine G ? Je comprend pas comment le signal peut augmenter ...

Dans ce QCM les réponses sont ABD 

 

Je ne comprend pas la C,D et E 

 

Merci!

[choLOLApine]

Salut!

 

Alors quand t'as des QCM comme ça il faut d'abord comprendre où sont placés la GFP et la renilla luciferase puisque c'est entre eux qu'il va y avoir de la résonance et qu'on pourra donc enregistrer un signal BRET, d'une intensité proportionnelle à leur rapprochement. 

 

Dans le premier QCM, la GFP est sur la sous-unité gamma et luciferase sur la sous-unité alpha (donc + ces deux unités sont proches, plus le signal est intense).

Or, un RCPG a une activité constitutive, qui fait qu'il active la protéine G même en absence de ligand, et cette activation entraîne la dissociation des sous unités alpha et beta/gamma. Comme tu l'as dit, l'agoniste inverse supprime cette activité constitutive et donc empêche la dissociation des sous unités -> elles sont de nouveau liées donc rapprochées donc augmentation du signal BRET. 

 

Dans l'autre QCM, la GFP n'est plus sur la sous-unité alpha mais sur le récepteur mu, la luciferase est sur la sous unité ai.  Donc ici, on ne mesure plus le rapprochement des deux sous-unités alpha et beta/gamma de la protéine G, mais celui du récepteur mu et de la sous-unité ai.

Pour l'item C, pour moi on a effectivement une diminution du signal, mais qui traduit l'activation du récepteur par le ligand et donc la dissociation de la sous unité ai du récepteur mu (et non pas de ai et bg), à confirmer tout de même par un tuteur @clemm8 ?  

Item D : effectivement, l'agoniste inverse supprime l'activité constitutive donc pas d'association du récepteur à la protéine G -> diminution du signal

Item E : le récepteur aux opiacés est un RCPG de classe A avec une 3e boucle intracellulaire longue sur laquelle se fixe la protéine G, donc si tu supprimes cette boucle, pas de liaison, pas de transfert d'énergie, pas de signal BRET.

 

En espérant avoir été assez claire  

Edited April 24, 2020 by lola_svry

[clemm8]

Salut @Jerry00 et @lola_svry  , 

 

Il y a 21 heures, lola_svry a dit :

Pour l'item C, pour moi on a effectivement une diminution du signal, mais qui traduit l'activation du récepteur par le ligand et donc la dissociation de la sous unité ai du récepteur mu (et non pas de ai et bg), à confirmer tout de même par un tuteur

 

Du coup je viens confirmer ça, je suis tout à fait d'accord avec toi @lola_svry il faut se référer à la localisation de la GFP et de la renilla luciférase  

 

Bon courage à vous deux !!