Larastapouette Posted April 21, 2020 Posted April 21, 2020 (edited) bonjour à tous, j'ai plusieurs questions sur les méthodes de transgénèse 1) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/17/661l.png dans cette méthode additionnelle, la souris obtenue à la fin (qui nait) est-elle hétérozygote ou homozygote ? car pour moi la moitié des gènes viennent du père donc sont transgéniques et l'autre moitié de la mère donc non transgénique Ducoup pour moi elle serai plutôt hétérozygote. A moins que comme c'est aléatoire on ne parle pas d'hétérozygotie et d'homozygoties ? 2) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/17/h89w.png est ce que cette technique juste vue comme ça est considérée comme une mutagénèse ciblée ? car ici je ne vois pas comment on peut choisir la zone d'insertion du transgène bien précisément juste en mettant le transgène dans les cellules de la masse cellulaire interne qui vont donc donner tout type de tissus, pour moi ça ressemble à l'additionnelle vue plus haut et autre chose, le fait de dire chimère c'est qu'il a la moitié des CELLULES avec le transgène ou la moitié des GENES avec le transgène ? en gros est ce que c'est moitié moitié dans chaque cellule ou moitié moitié des cellules dans tout le corps ? est ce que dans les cellules ES on fait que de la recombinaison homologue ou on peut faire aussi de l'additionnelle en ajoutant un transgène comme ça et on sait pas où il va ? 3) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/17/gxmx.png je ne comprends vraiment pas bien cette diapo, si quelqu'un pouvait me l'expliquer. comment on connait la séquence des gènes d'une cellule embryonnaire sachant qu'après elle va donner pleins de cellules différentes ? Ducoup après ce transgène il sera dans toutes les cellules ? est ce que cette homologie est au hasard ou est ce qu'on séquence les gènes des cellules embryonnaires de la blanche pour faire un vecteur avec la même séquence ? 4) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/17/v3yv.png ce système Cre-loxp nous permet de faire de la mutagénèse conditionnelle dans l'espace c'est ca ? et dans le temps on a quoi ? aussi comment on fait pour insérer aux 2 premières souris le système Cre pour l'une et lox P pour l'autre, exactement au bon endroit ? est ce que toutes les souris issues du croisement vont intégrer les deux systèmes à la fois et vont donc avoir l'excision du gène ou bien certaines n'auront pas les deux gènes ? le cre loxp est le seul système nous permettant de faire de la mutagénèse conditionnelle que nous devons connaitre ? 5) que signifie vraiment "mutagénèse" ? je sais qu'à la technique de transgénèse additionnelle on attribue la mutagénèse insertionnelle et qu'à la recombinaison homologue la mutagénèse dirigée mais est ce que c'est une conséquence ? je crois que je confond un peu les deux merci d'avance de vos réponses Edited April 21, 2020 by Lara-bl Quote
Solution Metallica Posted April 21, 2020 Solution Posted April 21, 2020 (edited) Et coucou Il y a 2 heures, Lara-bl a dit : dans cette méthode additionnelle, la souris obtenue à la fin (qui nait) est-elle hétérozygote ou homozygote ? car pour moi la moitié des gènes viennent du père donc sont transgéniques et l'autre moitié de la mère donc non transgénique Ducoup pour moi elle serai plutôt hétérozygote. A moins que comme c'est aléatoire on ne parle pas d'hétérozygotie et d'homozygoties ? Y avait eu un sujet qui évoquait ça C'est pas vraiment le caractère aléatoire de l'insertion qui va déterminer l’hétéro ou l'homozygotie c'est surtout le fait de savoir si le transgène va s'insérer tout court dans l'ADN. Je sais pas si c'est le cas à chaque fois mais dans les qcm on part du principe que c'est le cas et donc comme tu l'as dit si on respecte toutes les étapes de cette expérience, on obtiendra un individu transgénique hétérozygote. ;)) Il y a 2 heures, Lara-bl a dit : est ce que cette technique juste vue comme ça est considérée comme une mutagénèse ciblée ? car ici je ne vois pas comment on peut choisir la zone d'insertion du transgène bien précisément juste en mettant le transgène dans les cellules de la masse cellulaire interne qui vont donc donner tout type de tissus, pour moi ça ressemble à l'additionnelle vue plus haut et autre chose, le fait de dire chimère c'est qu'il a la moitié des CELLULES avec le transgène ou la moitié des GENES avec le transgène ? en gros est ce que c'est moitié moitié dans chaque cellule ou moitié moitié des cellules dans tout le corps ? est ce que dans les cellules ES on fait que de la recombinaison homologue ou on peut faire aussi de l'additionnelle en ajoutant un transgène comme ça et on sait pas où il va ? En fait, on ruse avec cette technique : on utilise le procédé de recombinaison homologue ( échange de matériel entre les deux locii d'ADN allèliques de deux chromosomes homologues) en construisant un transgène ayant dans sa constitution, des séquences d'ADN similaires à celle de l'allèle à invalider ,séquences qui seront reconnues comme étant compatibles pour une recombinaison homologue. Dans la théorie, ça permet de substituer l'allèle originale par ton transgène mais en pratique ce phénomène est très peu probable (1 cas sur 1000 environ), c'est pour cela que l'on utilise le test de double sélection néomycine/gancyclovir (qui permet de discriminer les cellules ayant intégré le transgène par recombinaison homologue de celles l'ayant intégré par mutagenèse aléatoire). pour la 2ème question, je ne sais pas s'il est exactement question de moitié/moitié mais en tt cas quand tu as une coexistence de cellules d'espèces différentes, on peut appeler ça un chimère. ( et moitié/moitié dans chaque cellule c'est être hétérozygote transgénique ;)) ). Pour la dernière, ça n'a pas d’intérêt de faire de l'insertion additionnelle sur des ES dans la mesure ou tu peux le faire dès le stade pronucléus et en plus ,en le faisant à ce stade là , toutes les futures cellules seront transgéniques ce qui ne sera pas le cas si l'expérience initiale a été faite sur des ES. Il y a 2 heures, Lara-bl a dit : je ne comprends vraiment pas bien cette diapo, si quelqu'un pouvait me l'expliquer. comment on connait la séquence des gènes d'une cellule embryonnaire sachant qu'après elle va donner pleins de cellules différentes ? Ducoup après ce transgène il sera dans toutes les cellules ? est ce que cette homologie est au hasard ou est ce qu'on séquence les gènes des cellules embryonnaires de la blanche pour faire un vecteur avec la même séquence ? C'est ce que je t'expliquais plus haut, même avec un transgène ayant les caractéristiques requises pour subir une recombinaison homologue, il est statistiquement bien plus probable d'avoir une insertion aléatoire, c'est bien pour ça que l'on utilise ce test de double sélection. Préalablement à l'insertion dans les ES, on fait en sorte d'introduire au sein de la séquence du transgène, un gène codant pour une protéine permettant la résistance à la néomycine et un autre gène codant pour une protéine rendant la cellule très sensible au gancyclovir. La subtilité ici , c'est qu'on se débrouille pour que les localisations de ces 2 gènes fassent en sorte que lors de la recombinaison homologue, seul le gène anti néomycine soit transporté (celui pro-gancyclovir n'étant pas intégré au sein du chromosome) ce qui ne sera pas le cas lors d'une insertion aléatoire ou les deux gènes seront transportés. Du coup, en faisant ce double test de sélection néomycine/gancyclovir, on va d'une part ,grâce à la néomycine, se débarrasser des cellules n'ayant pas du tout intégré le transgène et d'autre part, grâce au gancyclovir, se débarrasser des cellules qui ont intégré le transgène par insertion aléatoire. Au final, il ne restera que les cellules souches ayant intégré le transgène par recombinaison homologue Il sera seulement seulement dans les cellules issues de ES transgéniques qui sont issues d'une autre souris et ayant la propriété de rendre le page d'une couleur différente de celle générée par les ES de la souris dans laquelle on va introduire les ES transgéniques. Il y a 2 heures, Lara-bl a dit : ce système Cre-loxp nous permet de faire de la mutagénèse conditionnelle dans l'espace c'est ca ? et dans le temps on a quoi ? aussi comment on fait pour insérer aux 2 premières souris le système Cre pour l'une et lox P pour l'autre, exactement au bon endroit ? est ce que toutes les souris issues du croisement vont intégrer les deux systèmes à la fois et vont donc avoir l'excision du gène ou bien certaines n'auront pas les deux gènes ? le cre loxp est le seul système nous permettant de faire de la mutagénèse conditionnelle que nous devons connaitre ? Dans l'espace ça signifie qu'en intégrant au sein de la séquence du transgène un promoteur tissu spécifique, on peut décider de l'exprimer absolument ou l'on veut. Dans le temps ça signifie que la transcription du transgène pourra être contrôlée par un système d'interrupteur, interrupteur étant représenté par un ligand qui après fixation, va déclencher la transduction cellulaire permettant in fine la transcription du transgène. Pas besoin que ça soit inséré au bon endroit, on ne cherche pas à invalider spécifiquement un gène ici du coup ça sera par la technique classique d'insertion aléatoire. Si on part du principe que les souris initiales sont hétérozygote transgéniques alors il n'y a qu'1 chance sur 4 d'avoir un souriceau ayant les deux transgènes ;)) Pour la dernière, je vois pas d'autres exemples dans le cours donc à priori c'est le seul à connaitre Il y a 2 heures, Lara-bl a dit : 5) que signifie vraiment "mutagénèse" ? je sais qu'à la technique de transgénèse additionnelle on attribue la mutagénèse insertionnelle et qu'à la recombinaison homologue la mutagénèse dirigée mais est ce que c'est une conséquence ? je crois que je confond un peu les deux Je comprends pas très bien ta question... mutagenèse ça signifie simplement changer la séquence originale du gène. Les deux techniques que tu as citées apportent toutes deux des changements dans l'ADN Voilou Edited April 21, 2020 by Metallica Quote
Larastapouette Posted April 21, 2020 Author Posted April 21, 2020 @Metallica, génial merci beaucoup, juste quelques précisions si tu permets le système cre loxp est Ducoup inséré aux parents des souriceaux invalidés par les méthodes de transgénèses et pas par "thérapie génique" en mode que dans quelques cellules somatiques ? il y a 8 minutes, Metallica a dit : Pas besoin que ça soit inséré au bon endroit, on ne cherche pas à invalider spécifiquement un gène ici du coup ça sera par la technique classique d'insertion aléatoire. si on nous dit que c'est par exemple spécifiquement qu'on veut invalider un gène du foie, on pourra pas faire de l'aléatoire si ? enfet pour ma dernière question, je ne comprend pas bien la différence entre mutagénèse et transgénèse ? Quote
Metallica Posted April 21, 2020 Posted April 21, 2020 il y a 8 minutes, Lara-bl a dit : le système cre loxp est Ducoup inséré aux parents des souriceaux invalidés par les méthodes de transgénèses et pas par "thérapie génique" en mode que dans quelques cellules somatiques ? Il faut que ces caractéristiques soient transmises à la descendance on ne peut donc pas le faire dans quelques cellules somatiques, il faut également que ça soit le cas pour les gamètes. Le plus simple c'est d'utiliser une méthode de mutagénèse additionnelle pour obtenir les deux parents transgéniques, comme ça on sera certain que toutes les cellules auront été atteintes. il y a 10 minutes, Lara-bl a dit : enfet pour ma dernière question, je ne comprend pas bien la différence entre mutagénèse et transgénèse ? C'est la même chose :)) il y a 11 minutes, Lara-bl a dit : si on nous dit que c'est par exemple spécifiquement qu'on veut invalider un gène du foie, on pourra pas faire de l'aléatoire si ? si si, même s'il est inséré aléatoirement, il sera présent dans les cellules du foie. Et pour ce qui est de l'invalidation, c'est le promoteur tissu dépendant qui permettra l'invalidation spécifique du gène au niveau du foie ;)) Quote
Recommended Posts
Join the conversation
You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.