RANGUEIL 2016 IMMUNO

[Cl02]

Coucou

 

Alors je viens de faire ces 3 qcms et à chacun il y a un truc qui me perturbe...

 

Q3 https://goopics.net/i/K4Gw3 J'ai vu sur un ancien sujet que l'item C était faux car comme il n'y avait déjà pas de bande en immunotransfert normal il n'y en aurais pas non plus en éléctrophorèse bidimensionnelle mais est-ce que elle pourrait pas non plus être fausse car c'est le point isoélectrique de l'auto anticorps qui serait mis en évidence ? Je me mélange tout je crois...

 

Q4 https://goopics.net/i/lGbaA Dans celui-là je ne comprends pas comment on peut répondre aux items B et C sachant que les colonnes concernant les sérums des patients NMO sont toutes vides ?

 

Q5 https://goopics.net/i/owkaY Et ici je ne comprends pas pourquoi la E est Vrai...

 

Si quelqu'un peut m'aider ce serait vraiment cool merci !!!!

[Manon_G]

Salut, 

 

Alors je t’avouerai que je ne saurai pas te répondre pour la question 3. En revanche en ce qui concerne la question 4, c’est pas très compliqué pour l’item B tu vois que ton anticorps Anti-AQP4 reconnaît AQP4 dans les 2 cas où il est présent ce qui signifie qu’il reconnaît un epitope séquentielle car tu es en condition réductrice. Le fait d’être en condition réductrice signifie que tu as dénaturé tes protéines et comme elles ne sont plus dans leur conformation originelle et bien ça ne peut pas être un epitope conformationel qui est reconnu sinon tu n’aurais pas de bandes.
Et pour la C vu que NMO ne présente aucune bande cela signifie qu’il doit reconnaître certainement un epitope conformationnel en tout cas les résultats le suggèrent c’est une possibilité comme l’autre possibilité serait qu’il n’a pas pour cible l’AQP-4. 

La réponse E est vrai car tu vois que NMO ne reconnaît que la forme tétramérique d’AQP4, ce qui explique qu’elle ne reconnaisse pas AQP4-M1 qui est sous forme monomerique malgré qu’elle ai une boucle extra cellulaire identique. Par contre NMO ne reconnaît pas la forme mutée d’AQP4 qui est pourtant présente sous forme tetramérique ( tu le vois avec l’utilisation des anticorps anti-AQP4) ce qui veut dire que c’est bien la boucle extra cellulaire qui est absente dans l’AQP4 mutée qui est en cause dans l’absence de reconnaissance. 

 

J’espère que j’ai été assez claire et que tu auras compris si jamais ce n’est pas assez claire je peux essayé d’expliquer autrement. 
bon courage

[Metallica]

Salut 

 

Il y a 2 heures, Cl02 a dit :

J'ai vu sur un ancien sujet que l'item C était faux car comme il n'y avait déjà pas de bande en immunotransfert normal il n'y en aurais pas non plus en éléctrophorèse bidimensionnelle mais est-ce que elle pourrait pas non plus être fausse car c'est le point isoélectrique de l'auto anticorps qui serait mis en évidence ? Je me mélange tout je crois...

 

 

C'est l electrophorese qui permet de déterminer le phi et il n y a que l'Ag qui migre, l'Ac est utilisé après séparation 

[TonnerreDeBrest]

Il y a 4 heures, Cl02 a dit :

 

 

Q3 https://goopics.net/i/K4Gw3 J'ai vu sur un ancien sujet que l'item C était faux car comme il n'y avait déjà pas de bande en immunotransfert normal il n'y en aurais pas non plus en éléctrophorèse bidimensionnelle mais est-ce que elle pourrait pas non plus être fausse car c'est le point isoélectrique de l'auto anticorps qui serait mis en évidence ? Je me mélange tout je crois...

 

 

Coucou, 

alors pour le QCM 3 c'est ce que tu as dit oui, si déjà la protéine n'est pas détectée en immunotransfert monodimensionnel, où elle migre en fonction de sa taille; elle ne le sera pas non plus en immunotransfert bidimensionnel où elle migre en fonction de sa taille et de son pHi.

En revanche comme l'a dit Metallica, l'Ac marqué que tu utilises pour la detection, tu le dépose sur ta plaque après la migration des protéines à étudier, il ne migre pas lui, donc pas de risque de "l'auto détecter".

 

Voilà j'espère que ça répond à ta question, n'hésite pas si ce n'est pas clair pour toi

[Cl02]

Il y a 16 heures, Manon_G a dit :

La réponse E est vrai car tu vois que NMO ne reconnaît que la forme tétramérique d’AQP4, ce qui explique qu’elle ne reconnaisse pas AQP4-M1 qui est sous forme monomerique malgré qu’elle ai une boucle extra cellulaire identique. Par contre NMO ne reconnaît pas la forme mutée d’AQP4 qui est pourtant présente sous forme tetramérique ( tu le vois avec l’utilisation des anticorps anti-AQP4) ce qui veut dire que c’est bien la boucle extra cellulaire qui est absente dans l’AQP4 mutée qui est en cause dans l’absence de reconnaissance. 

 

Mais dans ce cas là @Manon_G l'item est hyper ambigu car il aurait fallut qu'ils parlent de la boucle extracellulaire présente lors de la forme tétraédrique... C'est ça qui m'a trop perturbé le fait que la boucle extracellulaire soit présente sur AQP4-M1 mais quelle ne soit pas reconnue par l'anticorps anti-AQP4...

 

Il y a 16 heures, Manon_G a dit :

c’est pas très compliqué pour l’item B tu vois que ton anticorps Anti-AQP4 reconnaît AQP4 dans les 2 cas où il est présent ce qui signifie qu’il reconnaît un epitope séquentielle car tu es en condition réductrice.

Et ici j'ai juste une petite question, avec ce que tu me dis l'immunofluorescence indirecte se fait en condition réductrices ? 

 

Sinon merci @Metallica, @TonnerreDeBrest et @Manon_G j'ai compris !!!

[Metallica]

Il y a 18 heures, Cl02 a dit :

l'item est hyper ambigu car il aurait fallut qu'ils parlent de la boucle extracellulaire présente lors de la forme tétraédrique... C'est ça qui m'a trop perturbé le fait que la boucle extracellulaire soit présente sur AQP4-M1 mais quelle ne soit pas reconnue par l'anticorps anti-AQP4...

 

C'est la même boucle, que l'on soit à l'état de monomère ou de tétramère, c'est juste qu'elle participe, au même titre que d'autres éléments présents qu'on est à l'état de tétramère, à l'établissement de l'épitope conformationnel.

 

En gros la reconnaissance d'AQP par le sérum NMO implique la présence de la boucle extracellulaire mais la réciproque n'est pas forcément vrai cad que la présence de la boucle extracellulaire n'assure pas à elle seule l'intégrité de l'épitope reconnu par les sérums.

 

Il y a 18 heures, Cl02 a dit :

Et ici j'ai juste une petite question, avec ce que tu me dis l'immunofluorescence indirecte se fait en condition réductrices ? 

 

l'immunofluorescence appartient aux techniques de révélation et celles-ci ne sont pas impactées par le caractère réducteur de l'expérience

 

 

 

Edited April 22, 2020 by Metallica

[Cl02]

Il y a 5 heures, Metallica a dit :

En gros la reconnaissance d'AQP par le sérum NMO implique la présence de la boucle extracellulaire mais la réciproque n'est pas forcément vrai cad que la présence de la boucle extracellulaire n'assure pas à elle seule l'intégrité de l'épitope reconnu par les sérums.

 

D'accord je comprends mieux !!!

 

Il y a 5 heures, Metallica a dit :

l'immunofluorescence appartient aux techniques de révélation et celles-ci ne sont pas impactées par le caractère réducteur de l'expérience

Ok dac

 

Merci beaucoup @Metallica