questions

[Larastapouette]

bonjour à tous, 

j'ai deux questions 

 

1) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/16/2stz.png dans ce QCM à l'item A (qui est vrai) je ne comprends pas comment on sait si c'est une forme clivé ou bien si c'est carrément une autre protéines ? je ne sais jamais comment résoudre ces QCM car je ne sais pas ce qui nous l'indique ? 

 

2) est ce que l'ELISA (toutes confondues : spot, indirect, classique et je dois en oublier) est une méthode dénaturante ou pas ? 

 

merci d'avance pour vos réponses 

[Metallica]

Yo

 

Il y a 3 heures, Lara-bl a dit :

dans ce QCM à l'item A (qui est vrai) je ne comprends pas comment on sait si c'est une forme clivé ou bien si c'est carrément une autre protéines ? je ne sais jamais comment résoudre ces QCM car je ne sais pas ce qui nous l'indique ? 

 

On pourrait envisager éventuellement une réaction croisée si on se réfèrait uniquement à l'AC1 mais bon même là le fait qu'il y ait le même épitope sur une même protéine de 65kDa présente dans les deux extraits Ba1 et Ba3 , disons que c'est pas l'hypothèse qu'on va favoriser.

 

De plus, l'Antisérum (qui par définition contient plein d'Ac de spécificités "épitopiques" différentes) reconnait également une bande à 65kDa dans les extraits Ba1 et Ba3. En sachant ça, difficile d'envisager une réaction croisée tant le nombre d'épitopes communs avec P1 serait grand. L' explication vraisemblable c'est celle de la forme clivée ;)).

 

Il y a 3 heures, Lara-bl a dit :

2) est ce que l'ELISA (toutes confondues : spot, indirect, classique et je dois en oublier) est une méthode dénaturante ou pas ? 

 

non ça n'est pas dénaturant (c'est d'ailleurs bien pour ça qu'il est utilisé comme comparatif à l'immunotransfert dans les qcm) par contre l'Elisa peut être couplé à d'autres techniques qui elles sont denaturantes (comme c'est le cas lors d'un immunotransfert où l'on a un SDS-PAGE suivi d'une immunodetection pouvant être réalisée avec un elisa)

Edited April 16, 2020 by Metallica

[LanaBanana]

Salut @Lara-bl !

 

il y a 25 minutes, Lara-bl a dit :

1) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/16/2stz.png dans ce QCM à l'item A (qui est vrai) je ne comprends pas comment on sait si c'est une forme clivé ou bien si c'est carrément une autre protéines ? je ne sais jamais comment résoudre ces QCM car je ne sais pas ce qui nous l'indique ? 

Dans l'énoncé on te dit que la bande de 70kDa = P1 ; 45kDa = P2 et 25 kDa = P3. A aucun moment on te dit qu'une de ces protéines fait 65 kDa donc tu peux déjà en conclure que ce n'est aucune des 3 (attention aux erreurs d'inattention où on vous dit "la bande de 45 kDa = P1" alors que dans l'énoncé il est clairement marqué que c'est P2). Comme 65 kDa est < à 70 kDa, il te reste 2 possibilités :

• Soit la bande à 65 kDa correspond aux protéines P2 + P3 qui n'auraient pas été séparées et donc qu'on aurait prélevées ensembles
• Soit la bande à 65 kDa correspond à la protéine P1 clivée. C'est-à-dire qu'elle a été coupée donc elle n'est plus aussi lourde qu'avant

Comme le poids de P2+P3 = 45+25 = 70 kDa, tu peux en conclure la bande de 65 kDa ne correspond pas à P2+P3 (vu que ce n'est pas le même poids)

Il te reste donc qu'une seule solution : le clivage de P1

 

Est-ce que c'est plus clair ?

 

Pour la deuxième question, je ne peux pas te répondre donc je vais laisser quelqu'un d'autre le faire (@Théophylline @Ratus peut-être ?)

[Ratus]

Non en effet, comme l'a dit Metalica l'ELISA n'est pas une méthode dénaturante, ce qui permet de faire un comparatif avec l'immunotransfert! (Petite astuce: Une question qui tombe assez souvent est "L'Ac A ne reconnait pas la molécule d'intérêt" que l'on peut croire vrai car il n'y a pas de bande en immunotransfert, mais qui est faux car si l'on regarde l'ELISA, une bande apparait donc l'Ac reconnait nécessairement la molécule!)

[Larastapouette]

Il y a 20 heures, LanaBanana a dit :

 2 possibilités :

• Soit la bande à 65 kDa correspond aux protéines P2 + P3 qui n'auraient pas été séparées et donc qu'on aurait prélevées ensembles
• Soit la bande à 65 kDa correspond à la protéine P1 clivée. C'est-à-dire qu'elle a été coupée donc elle n'est plus aussi lourde qu'avant

pourquoi ça pourrai pas être carrément une autre protéine ? 

 

sinon pour l'elisa c'est ok @Ratus, @Metallica

 

mais j'ai encore du mal avec ma première question...

[Metallica]

il y a 15 minutes, Lara-bl a dit :

pourquoi ça pourrai pas être carrément une autre protéine ? 

 

De plus, l'Antisérum (qui par définition contient plein d'Ac de spécificités "épitopiques" différentes) reconnait également une bande à 65kDa dans les extraits Ba1 et Ba3. En sachant ça, difficile d'envisager une réaction croisée tant le nombre d'épitopes communs avec P1 serait grand. L' explication vraisemblable c'est celle de la forme clivée ;)).

 

C'est à cause de ce que je te disais pour l'Antiserum. Que tous les Ac d'un antiserum (et non pas un Acmc) convergent vers une unique protéine de 65kDa, ça dessert l hypothese de la proteine non apparentée à P1 etant donné le nombre d' épitopes communs avec P1 ( protéine qui est aussi reconnu par l'As). Après ça pourrait être une proteine de la même famille (protéine qu on pourrait effectivement considérer comme différente) ce qui expliquerait les epitopes communs mais bon le nombre d epitopes communs + la taille qui fait fortement penser à un clivage ... Comme l'a dit l'item, c'est l'explication de la forme clivée qui prédomine 

[Larastapouette]

@Metallica, si l'antiserum avait reconnu une bande a 70 ET a 65 dans la même souche en même temps on aurai pas pu dire que c'était clivé c'est ça ? 

Edited April 17, 2020 by Lara-bl

[Metallica]

il y a une heure, Lara-bl a dit :

si l'antiserum avait reconnu une bande a 70 ET a 65 dans la même souche en même temps on aurai pas pu dire que c'était clivé c'est ça ?

 

Ah si si ça n'aurait pas changé le raisonnement tenu ci-dessus la forme originelle et clivée peuvent coexister au sein de la souche bactérienne mais il peut tout aussi bien n'y avoir qu'une seule des 2 formes

Edited April 17, 2020 by Metallica

[Larastapouette]

@Metallica, tu vas me prendre pour une débile complet, mais je comprends vraiment pas… je n'arrive pas à trouver de logique à tout ça, chaque fois que je vois un item qui demande ça je sais pas quoi regarder, je n'arrive pas a me dire "tiens on voit ca donc c'est ça"

 

déjà comment on sait que cette protéine de 65 a de nombreux épitopes en commun avec P1 comme tu dis ? 

enfet toi quand tu vois un QCM comme ça tu regardes quoi exactement pour pouvoir répondre ? 

[Metallica]

Il y a 4 heures, Lara-bl a dit :

déjà comment on sait que cette protéine de 65 a de nombreux épitopes en commun avec P1 comme tu dis ?

 

parce que l'As qui reconnait P1 reconnait aussi cette prot de 65kDa or comme je l'ai dit au dessus un Antisérum est composé de plein d'Ac reconnaissant des épitopes différents du coup même si la prot de 65kDa n'est pas la forme clivée de P1 il n’empêche que structurellement parlant elles seront très proches de par ces nombreux épitopes communs reconnus par l'As

 

Il y a 4 heures, Lara-bl a dit :

enfet toi quand tu vois un QCM comme ça tu regardes quoi exactement pour pouvoir répondre ? 

 

Généralement quand c'est une réaction croisée ça ne concerne qu'un seul Anticorps monoclonal et non pas un antisérum et aussi l'Ac en question est le seul parmi les autres anticorps monoclonaux proposés à reconnaitre la protéine soupçonnée d’être à l'origine de la réaction croisée. C'est souvent ce schéma là qui permet de comprendre que c'est une réaction croisée.

 

 

Edited April 17, 2020 by Metallica

[Larastapouette]

@Metallica, ok merci beaucoup je crois que je commence à comprendre 

si ici la protéine de 65 n'avait pas été reconnue par l'AS on aurai pu évoquer une réaction croisée ducoup (et encore plus si il n'y avait que l'ACmc 1 par exemple qui l'avait reconnue) c'est ca ? 

[Metallica]

Il y a 5 heures, Lara-bl a dit :

si ici la protéine de 65 n'avait pas été reconnue par l'AS on aurai pu évoquer une réaction croisée ducoup (et encore plus si il n'y avait que l'ACmc 1 par exemple qui l'avait reconnue) c'est ca ? 

 

Yes tout à fait

[Larastapouette]

@Metallica, ok merci , merci pour ta patience