QCM immuno

[Wonder]

Bonjour, je n'arrive pas à comprendre les réponses de certains des items de ces QCM, merci par avance ! 

 

QCM 12  : Vous disposez d’une lignée cellulaire (CR) issue du cancer du rein humain. Comme le cancer dont elle est issue, cette lignée exprime un antigène (Ag) protéique de 75KDa appelé M, absent des cellules rénales normales. Vous souhaitez étudier l’Ag M.
Vous avez purifié l’AgM à partir de la lignée CR et vous avez produit une série d’anticorps monoclonaux (ACm) de souris contre cet Ag selon un protocole classique. Vous avez sélectionné 4 hybridomes (I, II, III et IV) par ELISA, en utilisant l’Ag M purifié adsorbé sur des plaques de microtitration en polystyrène.

Vous vérifiez ensuite leur spécificité par électrophorèse en PAGE-SDS suivie d’autoradiographie à partir d’immunoprécipités d’extraits protéiques de la lignée CR préalablement radiomarqués. Avec chacun des anticorps (I, II, III et IV), vous observez une bande à 75kDa. Avec l’anticorps I, vous observez en plus une bande de 40kDa.

En immunotransfert (ou immuno-empreinte), avec le même extrait non radiomarqué, l’anticorps I reconnaît une bande de 75kDa et une bande de 40kDa. Les anticorps II et III identifient une bande de 75kDa. L’anticorps IV ne présente aucune réactivité.

Vous cherchez à savoir si, à partir des cellules de cancer du rein, l’Ag M est libéré dans le sang circulant. Il pourrait alors constituer un marqueur sérique pour le diagnostic de cancer du rein. Vous souhaitez donc développer une technique permettant de détecter spécifiquement la forme soluble de l’Ag M de 75kDa grâce aux anticorps que vous avez produits.

Il est exact de dire que :

1. Dans le milieu de culture de la lignée CR, vous pouvez réaliser une évaluation semi-quantitative de l’Ag M en dot blot, en utilisant l’anticorps I. FAUX

2. Dans le milieu de culture de la lignée CR, vous pouvez réaliser une évaluation semi- quantitative de l’Ag M en immunotransfert, en utilisant l’anticorps I. VRAI

 

Dans le cadre d’un programme de recherche sur le cancer du rein, vous entreprenez de produire des anticorps monoclonaux (ACm) de souris contre de nouveaux antigènes tumoraux. Vous disposez d’une lignée cellulaire humaine (CR) dérivée d’un cancer du rein et de tissu provenant de la même tumeur.

Vous avez immunisé une série de souris avec un extrait de protéines solubles de la lignée CR et vous mettez en œuvre la production d’ACm selon la technologie des hybridomes. Afin d’identifier tous les ACm reconnaissant un antigène exprimé par la lignée CR, vous allez associer plusieurs méthodes de criblage.

1. Vous pouvez cribler les surnageants des hybridomes à l’aide d’un ELISA-sandwich, en utilisant l’extrait protéique total de la lignée CR utilisé pour l’immunisation. (faux)

 

QCM 22 : Vous avez sélectionné, par immunofluorescence indirecte sur les cellules de la lignée CR, 4ACm (A, B, C, D) dont vous voulez analyser la réactivité en détail.

Sur des immunotransferts (immunoempreintes) réalisés à partir d’un extrait contenant les protéines solubles du tissu tumoral, l’ACm A reconnaît une bande de 100 kDa. L’ACm B reconnaît une bande de 70 kDa et une bande 100 kDa. L’ACm C reconnaît une bande de 80 kDa. L’ACm D ne présente aucune réactivité.

En immunofluorescence indirecte sur cryocoupes de tissu tumoral, vous observez un marquage avec les 4 ACm mais A, B, C, D marquent spécifiquement les cellules cancéreuses, alors que C marque les cellules cancéreuses et les cellules normales.

1. L’épitope reconnu par D est un épitope séquentiel accessible sur la molécule-cible uniquement dans la conformation cellulaire ou tissulaire de celle-ci. (faux)

 Vous souhaitez caractériser les antigènes reconnus par les ACm et spécifiquement exprimés par les cellules cancéreuses. Pour la résolution de cet exercice, considérez qu’une protéine est pure lorsqu’elle ne donne qu’une bande en SDS-PAGE.

1. Afin d’obtenir un antigène spécifique des cellules tumorales, vous devrez purifier l’antigène reconnu par C, à partir de la lignée cellulaire CR. (faux)

[Metallica]

Bonsoir @Wonder

 

il y a 19 minutes, Wonder a dit :

• Dans le milieu de culture de la lignée CR, vous pouvez réaliser une évaluation semi-quantitative de l’Ag M en dot blot, en utilisant l’anticorps I. FAUX

• Dans le milieu de culture de la lignée CR, vous pouvez réaliser une évaluation semi- quantitative de l’Ag M en immunotransfert, en utilisant l’anticorps I. VRAI

 

il y a 19 minutes, Wonder a dit :

Vous pouvez cribler les surnageants des hybridomes à l’aide d’un ELISA-sandwich, en utilisant l’extrait protéique total de la lignée CR utilisé pour l’immunisation. (faux)

 

le protocole de l'ELISA sandwich est adapté aux Ag autres que les Ac et sachant que le surnageant en question est composé d'Ac, un Elisa indirect sera plus adapté ;)))

 

 

il y a 23 minutes, Wonder a dit :

L’épitope reconnu par D est un épitope séquentiel accessible sur la molécule-cible uniquement dans la conformation cellulaire ou tissulaire de celle-ci. (faux)

 

L'affirmation est vraie à partir de "accessible..." puisqu'elle correspond à une des propriétés de l'épitope qui est reconnu par l'AC D c'est à dire un épitope conformationnel or dans l'item on parle d'épitope séquentiel d’où le fait qu'il soit faux.

 

 

il y a 32 minutes, Wonder a dit :

Afin d’obtenir un antigène spécifique des cellules tumorales, vous devrez purifier l’antigène reconnu par C, à partir de la lignée cellulaire CR. (faux)

 

tout simplement parce que dans l'énoncé on te dit que l'Ac marque les cellules cancereuses et les cellules normales dont l'Ag reconnu par l'Ac C n'est pas specifique des cellules tumorales

 

Voilou

 

 

[Wonder]

Il y a 22 heures, Metallica a dit :

Bonsoir @Wonder

 

 

 

le protocole de l'ELISA sandwich est adapté aux Ag autres que les Ac et sachant que le surnageant en question est composé d'Ac, un Elisa indirect sera plus adapté ;)))

 

 

 

L'affirmation est vraie à partir de "accessible..." puisqu'elle correspond à une des propriétés de l'épitope qui est reconnu par l'AC D c'est à dire un épitope conformationnel or dans l'item on parle d'épitope séquentiel d’où le fait qu'il soit faux.

 

 

 

tout simplement parce que dans l'énoncé on te dit que l'Ac marque les cellules cancereuses et les cellules normales dont l'Ag reconnu par l'Ac C n'est pas specifique des cellules tumorales

 

Voilou

 

 

merci encore x 1000 !!!