Immunoprécipitation

[Please]

Bonjour ! Petite précision : En immunoprécipitation, lors de l’analyse des résultats, on considère qu’il n’y a plus que des épitopes conformationnels ?

[Metallica]

Coucou @Please

 

il y a 19 minutes, Please a dit :

En immunoprécipitation, lors de l’analyse des résultats, on considère qu’il n’y a plus que des épitopes conformationnels ?

 

Pas forcément non, les 2 types d'epitopes pourront être révélés avec cette technique ..c'est comparativement à un immunotransfert qu'on pourra faire la deduction du type d'epitope que l'on a révélé en immunoprecipitation 

Edited April 2, 2020 by Metallica

[Please]

il y a 6 minutes, Metallica a dit :

Coucou @Please

 

 

Pas forcément non, les 2 types d'epitopes pourront être révélés avec cette technique ..c'est comparativement à un immunotransfert qu'on pourra faire la deduction du type d'epitope que l'on a révélé en immunoprecipitation 

Cououc @Metallica Je t'avoue que je ne comprends pas Parce que dans le poly (page 25) il est noté que l'immunoprécipité et l'extrait protéique de départ sont séparés en gel de polyacrylamide SDS par electrophorese... Or le SDS dénature non ?

[Metallica]

@Please

 

Ça devrait t'aider ;))

 

 

[Théophylline]

Salut @Please ! 

 

Je fais un petit récap : 

 

En immunoprécipitation (IP), tu peux détecter des Ac séquentiels (= séquence d'acides aminés) ou conformationnels. Ensuite oui on fait un western blot pour la révélation dans des conditions dénaturantes et la protéine isolée en IP sera dénaturée. Mais ce n’est donc pas l’immunoprécipitation qui dénature la protéine, c’est le western blot utilisé pour la révélation.. 

 

Si je résume, il y a 2 étapes :
1. L’immunoprécipitation :
Si tu as un Ac spé de la protéine tu pourras l’isoler et ce peu importe le type d’épitope reconnu par l’Ac (conditions non dénaturantes)

 

2. Révélation par WB :
Les conditions sont dénaturantes donc il faudra bien choisir l’Ac que tu vas utiliser car s’il reconnaît un epitope conformationnel de la protéine, tu auras un faux négatif (pas de reconnaissance alors que la protéine sera là) mais l'Ac est toujours bien choisi

 

Ce qui fait qu'en IP, même si après on fait un WB, l'Ac de base peut être conformationnel ou séquentiel. 

 

J'espère qu'avec ça + les explications de Metallica c'est plus clair pour toi !