QCM 15 et 16 CCB 2013

[AnneClaireT]

Bonjour,

 

Je n'arrive pas vraiment à faire ces deux QCMs (15 et 16), si quelqu'un pouvait me renseigner

Merci

scan0006.pdf

[PierreRM]

Salut

pour le 15:

A la phosphatase enlève un phosphate on utilise alors une kinase pour ajouter un phosphate

B La question qui me pose le plus de problème il faut faire le schéma du principe de la pcr avec des couleurs  difficile à expliquer par écrit si tu ne trouve pas vien aux permanences important mais des couleurs et fait plusieurs il ne faut pas s'arrêter au premier 

C normalement la fidélité n'est pas le plus important mais surtout la résistance à la chaleur mais dans le cas présent on veut jouer sur une mutation précise il faut donc une forte fidélité

D l'ADN répliqué à partir des amorces ne se collent pas aux 2 extrémités du coup il reste linéaire

E Il te faut faire le calcul donné par le prof :

quantité*taille adn amplifié/ taille génome * 2 puissance nbr de cycle ce qui te donnes 0.1*4000/4000*3.4*10 puissance 7 = 3.4*10 -6 = 3.4 micrometre

PS l'adn amplifié est de 4000 car on amplifie tout le plasmide  

[PierreRM]

Pour le 16

A pour que notre produit de PCR se conduise comme un plasmide on a besoin de le circularisé en ligaturant ses deux extrémités mais elles doivent être phosphorylé 

B que les amorces soient décalées n'est pas gênant car lors de la réplication tout le génome sera répliqué du coup on ne perdra pas d'ADN 

C c'est une diapo du cours sur la transformation bactérienne il faut transformé les bactéries avec du chlorure de clcium

D et E pour la ligase il faut de l'ATP 

[ninou]

Alors, si j ai bien compris le but de l'exercice est de créer un plasmide contenant un promoteur muté, afin d'étudié la fonction du promoteur et son role sur l'expression du gène dans l'exercice suivant ( que tu n'a peut etre pas , car ce sujet est le simple copié collé de deux exos qu'il avait posé en 2011)

pour cela, on clone le fragment de 240 pb dans le plasmide. On rappelle que ce fragment correspond au promoteur sain.

Ainsi on se retrouve avec un plasmide contenant un promoteur sain. Afin d'obtenir une mutation, on dispose de deux oligodesoxynucleotides a et b , avec a porteur de la mutation à introduire.

je ne veux pas te dire de bétise donc je t'invite a aller voir le/la chargée de td pour qu'il t'explique ce qui se passe exactement pendant la pcr ( item B )

pour la a : faux, phosphoryler et le role de la kinase

c: faux on a besoin dans ce cas s'une adn pol FIDELE car le but est d'introduire une mutation

d: faux, la polymérase synth des brins lineaire et c'est apres la polymerisation que les brins vont se circulariser grace au phosphate en 5' des oligodesoxynt qui vont créer une liaison phosphodiester avec le oh en 3' des brins néosynth et la ligase (utilisé dans l'exercice suivant)

e: on 0.1 x1O^-12 g d 'adn qu'on multiplie par le nombre de cycle ( 3.4x10^7) qui donne bien la quantité donné en E, on ne parle parle pas de facteur de proportion car le plasmide est tres petit , la quantité amplifié par rapport a la taille du plasmide est négligeable ( c'est la chargée de td qui me l'avait dit

QCM SUIVANT !

a: vrai , si pas de phosphate, pas de ligation, donc pas de plamside

b: faux, cela n'empechera pas la ligation de se produire dans la mesure où on a tjr notre ligase, notre oh en 3' et notre P en 5' de nos amorces

c: vrai, l'incorporation dans une bacterie est un evenement rare, donc si on l'aide pas en plus, on a encore moins de chance d'avoir des bactéries ayant incorporé le plamside

d: vrai , car la ligase a besoin d'atp !

e: vrai car la ligase a besoin d'ATP et pas de dATP

[AnneClaireT]

Merci à vous deux! J'ai bien compris maintenant!