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Analyse d'acides nucléiques couplés à une sonde


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Bonjour, 

 

Dans le TD de recherche en UE8 (levade), dans le QCM 15, je ne comprends pas pourquoi l'item C est compté faux. J'ai noté parce que si la sonde est dégradé, on aura aucun signal. Je voulais donc savoir: "Quand on a un fragment d'ADN (ou ARN), et que l'on fixe une sonde, est-ce possible d'obtenir deux bandes de tailles différentes (avec une méthode de Southern/Western) si ce même AN (couplé avec la sonde) est coupé en deux par une endonucléase ou autre enzyme de restriction ? 

 

Je ne sais pas si ma question est très claire, dites moi si ce n'est pas le cas. Merci d'avance. LRT

  • Solution
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Salut @LaRateATouille

 

Il y a 2 heures, LaRateATouille a dit :

Dans le TD de recherche en UE8 (levade), dans le QCM 15, je ne comprends pas pourquoi l'item C est compté faux. J'ai noté parce que si la sonde est dégradé, on aura aucun signa

 

Effectivement, si la sonde est dégradée , plus de signal émis par celle-ci et par conséquent pas de signal reçu observable et quantifiable.

 

 

Il y a 2 heures, LaRateATouille a dit :

Je voulais donc savoir: "Quand on a un fragment d'ADN (ou ARN), et que l'on fixe une sonde, est-ce possible d'obtenir deux bandes de tailles différentes (avec une méthode de Southern/Western) si ce même AN (couplé avec la sonde) est coupé en deux par une endonucléase ou autre enzyme de restriction ? 

 

Tous les cas de figures sont possibles j'imagine:

Premier cas , la séquence nucleotidique sur laquelle s'hybride la sonde est présente en un seul exemplaire sur l'ARN/ADN et en dehors du site de restriction. Dans le cas présent, on aura la révélation d'un seul des 2 fragments.

 

Deuxième cas , celui où il n'y aurait encore une fois qu'un seul exemplaire de la séquence nucleotique sur laquelle s'hybriderait la sonde mais qui cette fois se trouverait sur le site de restriction d'une endonucléase. Ici on aurait une perte totale du signal et donc aucune bande révélée. 

 

Troisième cas (celui qui t'interesse) serait celui où il y aurait plusieurs exemplaires de la séquence nucleotidique sur laquelle s'hybriderait la sonde mais en dehors du site de restriction de l'endonucléase. Avec cette configuration, on obtiendrait plusieurs bandes correspondant aux différents fragments après action de l'endonucléase

 

Posted
Il y a 2 heures, Reïner a dit :

Salut @LaRateATouille

 

 

Effectivement, si la sonde est dégradée , plus de signal émis par celle-ci et par conséquent pas de signal reçu observable et quantifiable.

 

 

 

Tous les cas de figures sont possibles j'imagine:

Premier cas , la séquence nucleotidique sur laquelle s'hybride la sonde est présente en un seul exemplaire sur l'ARN/ADN et en dehors du site de restriction. Dans le cas présent, on aura la révélation d'un seul des 2 fragments.

 

Deuxième cas , celui où il n'y aurait encore une fois qu'un seul exemplaire de la séquence nucleotique sur laquelle s'hybriderait la sonde mais qui cette fois se trouverait sur le site de restriction d'une endonucléase. Ici on aurait une perte totale du signal et donc aucune bande révélée. 

 

Troisième cas (celui qui t'interesse) serait celui où il y aurait plusieurs exemplaires de la séquence nucleotidique sur laquelle s'hybriderait la sonde mais en dehors du site de restriction de l'endonucléase. Avec cette configuration, on obtiendrait plusieurs bandes correspondant aux différents fragments après action de l'endonucléase

 

Merci beaucoup chef, c'est bien plus clair! Bonne journée

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