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purification des prot


Go to solution Solved by dupuyadèle,

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saut qu'est ce qu'on doit retenir sur le "fractionnement subcellulaire" svp ?

et la "précipitation fractionnée" ? c'est une précipitation en plusieurs étapes ?

  • Solution
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@DrR

Salut ! 🙂

 

Concernant le fractionnement cellulaire, c'est une méthode que tu utilises lorsque tu cherches à récupérer une ou des protéines qui sont localisées dans un compartiment ou organite spécifique de ta cellule. Au lieu de travailler sur toute la cellule, tu isoles d'abord l'organelle qui t'intéresse par centrifugation différentielle. Typiquement, si tu veux travailler sur un RCPG, il faudra que tu isoles la membrane de ta cellule. Si tu t'intéresses plutôt à un facteur de transcription, ce sera le noyau que tu devras récupérer pour l'extraction de ta protéine d'intérêt. 

 

Pour la précipitation fractionnée, c'est une méthode qui repose sur la diminution de la solubilité des protéines à haute concentration en sels. Selon la concentration en sels appliquée à une solution aqueuse contenant ton mélange de protéines que tu cherches à séparer, tu pourras faire précipiter les  différentes catégories de protéines séparément en augmentant progressivement la concentration en sels ! Si mes souvenirs sont bons, il me semble que c'est le sulfate d'ammonium que tu utilises comme sel. 

 

voilà, c'est bon pour toi ? 😉

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Il y a 11 heures, dupuyadèle a dit :

@DrR

Salut ! 🙂

 

Concernant le fractionnement cellulaire, c'est une méthode que tu utilises lorsque tu cherches à récupérer une ou des protéines qui sont localisées dans un compartiment ou organite spécifique de ta cellule. Au lieu de travailler sur toute la cellule, tu isoles d'abord l'organelle qui t'intéresse par centrifugation différentielle. Typiquement, si tu veux travailler sur un RCPG, il faudra que tu isoles la membrane de ta cellule. Si tu t'intéresses plutôt à un facteur de transcription, ce sera le noyau que tu devras récupérer pour l'extraction de ta protéine d'intérêt. 

 

Pour la précipitation fractionnée, c'est une méthode qui repose sur la diminution de la solubilité des protéines à haute concentration en sels. Selon la concentration en sels appliquée à une solution aqueuse contenant ton mélange de protéines que tu cherches à séparer, tu pourras faire précipiter les  différentes catégories de protéines séparément en augmentant progressivement la concentration en sels ! Si mes souvenirs sont bons, il me semble que c'est le sulfate d'ammonium que tu utilises comme sel. 

 

voilà, c'est bon pour toi ? 😉

merciii !!

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