TAT is the question

[Liliputienne]

Bonjouuur à vous les loustics d'UE8, si jamais vous avez du temps est-ce que vous pouvez m'aider sur ces QCM siouplait ? 

 

POLY DU TAT QCM14B

Pour identifier les animaux qui produisent des anticorps anti-Pc, vous pouvez tester le sérum des souris par ELISA indirect, en utilisant l'extrait Pc. Vrai

Là j’ai un soucis, en ELISA indirect on est supposé utiliser que des AcMc et pas des As ?

 

POLY TAT QCM 16

 

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Vous cherchez à posséder un vaccin induisant la synthèse d'anticorps anti-P1, Vous vaccinez vos souris avec les différentes souches atténuées. Avant de les infecter avec la souche Pc pour vérifier l'efficacité du vaccin, vous voulez vérifier la présence d'anticorps anti-P1 dans le sérum des souris.

 

item A

Vous pouvez purifier la protéine P1 par chromatographie d'affinité à partir d'un extrait protéique de Pc en utilisant l'ACm2, puis tester les sérums des animaux vaccinés par ELISA indirect sur la protéine purifiée. Faux

item B

Vous pouvez purifier la protéine P1 par chromatographie d'affinité à partir d'un extrait protéique de Pc en utilisant I'ACm3 puis tester les sérums des animaux vaccinés par ELISA indirect sur la protéine purifiée. Vrai

 

 

Pour moi la A est vrai est la B est fausse. Le but de faire une chromatographie d’affinité c’est de purifier les extraits utilisés : donc il est préférable de mettre un AcMc sur la colonne qui pourrait potentiellement induire une réaction croisée pour récupérer en sortie de colonne un extrait ne contenant que des AcMc issus de l’extrait protéique dirigé justement contre l’antigène d’intérêt.

Donc au final il vaut mieux mettre quel Ac sur la colonne ?

[Metallica]

Yo @Liliputienne

 

  On 2/23/2020 at 7:19 AM, Liliputienne said:

POLY DU TAT QCM14B

Pour identifier les animaux qui produisent des anticorps anti-Pc, vous pouvez tester le sérum des souris par ELISA indirect, en utilisant l'extrait Pc. Vrai

Là j’ai un soucis, en ELISA indirect on est supposé utiliser que des AcMc et pas des As

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L'As est constitué de plein d'Acmc donc si tu immunises un autre animal avec le sérum de souris, tu auras un autre As dirigé contre le premier As ...tu vas donc avoir de multiples ELISAindirect 

 

  On 2/23/2020 at 7:19 AM, Liliputienne said:

Pour moi la A est vrai est la B est fausse. Le but de faire une chromatographie d’affinité c’est de purifier les extraits utilisés : donc il est préférable de mettre un AcMc sur la colonne qui pourrait potentiellement induire une réaction croisée pour récupérer en sortie de colonne un extrait ne contenant que des AcMc issus de l’extrait protéique dirigé justement contre l’antigène d’intérêt.

Donc au final il vaut mieux mettre quel Ac sur la colonne ?

Expand  

 

Je comprends pas trop ce qui te pose problème, l'Acm 2 ne sera pas utile car il reconnaît P3 et non pas P1 donc on ne pourra pas isoler P1 en revanche l'Acm3 reconnaît bien p1 ( bande à 70kda sur l'extrait Pc ) donc ça sera bon

Edited February 23, 2020 by Metallica

[Liliputienne]

  On 2/23/2020 at 9:59 AM, Metallica said:

L'As est constitué de plein d'Acmc donc si tu immunises un autre animal avec le sérum de souris, tu auras un autre As dirigé contre le premier As ...tu vas donc avoir de multiples ELISAindirect 

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J’étais persuadée qu’on pouvait uniquement utiliser des Ac Mc, mais je note que c’est pas toujours le cas du coup ! 
 

  On 2/23/2020 at 9:59 AM, Metallica said:

Je comprends pas trop ce qui te pose problème, l'Acm 2 ne sera pas utile car il reconnaît P3 et non pas P1 donc on ne pourra pas isoler P1 en revanche l'Acm3 reconnaît bien p1 ( bande à 70kda sur l'extrait Pc ) donc ça sera bon

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Justement parce que Acm2 reconnaît P3, si tu le mets sur ta colonne de chromato il fixe l’Ag P3 donc au final quand tu récupères les protéines qui ne se sont pas accrochés à la colonne aucune ne possède P3. 
 

Mais si tu mets l’Acm3 les cellules qui possèdent P1 ne sortiront pas de la colonne vue qu’elles seront fixées auparavant. Est-ce que tu vois ce que je veux dire ?  

[Metallica]

  On 2/23/2020 at 8:39 PM, Liliputienne said:

Justement parce que Acm2 reconnaît P3, si tu le mets sur ta colonne de chromato il fixe l’Ag P3 donc au final quand tu récupères les protéines qui ne se sont pas accrochés à la colonne aucune ne possède P3. 
 

Mais si tu mets l’Acm3 les cellules qui possèdent P1 ne sortiront pas de la colonne vue qu’elles seront fixées auparavant. Est-ce que tu vois ce que je veux dire ?  

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C'est justement ce que tu retiens sur la colonne qui pourra être isolé ...une fois que  tout l'extrait protéique (exceptée  la protéine d’intérêt) aura été réceptionné dans le tube contenant une solution (que l'on enlèvera par la suite d'en dessous  de la colonne) , tu utiliseras un produit permettant d'éluer les complexes Acmc-Ag qui se retrouveront isolés dans la solution ( ce qu'on voulait au départ).

 

En faisant ce que tu as dit il faudrait que l'on retienne sur la colonne toutes les protéines n'étant pas P1 pour se retrouver avec P1 dans le volume d'élution...ça devient bien plus complexe que la première technique

Edited February 24, 2020 by Metallica

[Liliputienne]

@Metallica Du coup avec ce que tu dis, je pense que la technique dont je parle est beaucoup plus appropriée si on veut purifier après une réaction croisée (sinon comme tu l'as souligné ça prendrais trente ans ) 

 

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Big up de ce 1000ème message à toi (on pense fort à ce soirées UE2) 

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coeur coeur et dab en pagaille

 

 

 

[Théophylline]

Salut @Liliputienne !

 

@Metallica a raison, on met sur la colonne un Ac spécifique de la protéine que l'on veut purifier. Comme ça on "jette" toutes les protéines qui ne se fixent pas à l'Ac et après on décroche la protéine d'intérêt de l'Ac utilisé (qui est donc purifiée). 

[Liliputienne]

Merci de la confirmation @Théophylline