cours PERRET gel filtration

[purpann]

Bonjour,

je ne comprends pas le fonctionnement du gel de filtration pouvez vous me l'expliquer s'il vous plait merci?

[purpann]

et la chromatographie d'échange ions non plus pouvez vous me l'expliquer

[LdvMstr]

Coucou, 

 

Alors, la gel filtration : c'est quand on introduit une mélange de molécules de taille différentes dans un gel de dextrane ( billes poreuses : enchaînement linéaire de glucose en alpha (1-6)).

Les molécules les plus petites sont incluses dans les pores, donc leur vitesse de migration va être plus faibles que les grosses molécules. Ainsi les grosses molécules vont être éluées en premier, et les petites molécules en dernier car elles vont être retenue dans le gel de dextrane plus longtemps.

La gel filtration est une méthode non dénaturante, c'est-à-dire que l'on conserve la molécule à l'état natif.

[LdvMstr]

Pour la chromatographie échangeuse d'ions, le but est de purifier une protéine selon sa charge ionique.

Par exemple, pour la chromatographie échangeuse d'anions : ici, on souhaite purifier une protéine anioniques (donc chargée -).

• On utilise une colonne de DEAE (chargée +) = résine de cellulose ou de sépharose sur laquelle est fixée du DEAE chargé +.
• Ensuite, on introduit dans la colonne un mélange protéique.
• Les protéines anioniques vont être retenues et les protéines cationiques seront non retenues.
• Puis, on va éluer les protéines retenues sur la colonne, en augmentant le gradient de concentration de NaCl.
• Ainsi, les ions Cl- vont rentrer en compétition avec les charges (-) des protéines. Progressivement, on va diminuer le pHi des protéines retenues. Donc, les protéines de pHi de 7 étant moins anioniques que les protéines de pHi de 5 vont sortir en premier ; Et ainsi de suite.

 

N.B : pour la chromatographie échangeuse de cations (+) = on utilisera une colonne de carboxylique-methyl cellulose (chargée -).