La recherche c'est bien, trouver c'est mieux

[Liliputienne]

Bonjour ! Après quelques QCM du poly du TAT sur l'UE8 () il reste des trucs que j'ai pas bien compris 

 

Révélation

Bonne lecture aux plus vaillants 

 

Enoncé QCM 2 

 

Révélation

« Un patient atteint de micrométastases de la moelle osseuse vient vous voir pour subir une immunothérapie anti-tumorale. On dispose d’un lot d’Anticorps nommé Me, qui ne présente pas de réactions croisées sur les cellules de la moelle osseuse, et qui reconnaît spécifiquement les cellules métastatiques (par le biais d’une molécule d’adhérence membranaire Ep-CAM  

 

item B Vous pourrez détruire les cellules cancéreuses de la moelle osseuse grâce à des anticorps Me couplés à un radio-isotope de haute énergie" Vraie

 

--> On part du principe que vu que Me ne présente aucune réaction croisée il n’y a pas de risque que la radioactivité aille ailleurs et finisse par tuer le patient ? (ce qui serait balo vu qu’on essaye de le soigner quand même)

 

Enoncé aux QCM6/7

 

Révélation

 

« On cherche à mettre en évidence chez les patientes atteintes de cancer du sein l’existence de cellules cancéreuses métastatiques au niveau du parenchyme pulmonaire par des méthodes immunologiques. On disposera alors de 2 Anticorps (Ac) monoclonaux de souris (Cp, CL3), de classe G dirigés contre des Antigènes (Ag) exprimés par les cellules cancéreuses.

 

On dispose également d’un Ac monoclonal de rat (QD), de classe G, dirigé contre un Ag présent sur certaines cellules du parenchyme pulmonaire normal.

Ces Ac sont commercialisés, et il est dit que :

-  Cp reconnaît un épitope du cytoplasme des cellules cancéreuses,

-  CL3 reconnaît une molécule d’adhérence membranaire, non exprimée par des cellules normales du parenchyme pulmonaire,

- QD reconnaît un Ag présent uniquement dans les cellules du parenchyme.

 

 

 

 

Enoncé QCM 6

 

Révélation

 

On souhaite tout d’abord vérifier que Cp et CL3 ne reconnaissent que les cellules cancéreuses et que QD ne reconnaisse que les cellules du parenchyme pulmonaire.

Vous allez alors tester chacun de ces Ac sur les 3 types d’échantillons suivants :
- parenchyme pulmonaire normal

- cellules cancéreuses
- parenchyme pulmonaire contenant des cellules cancéreuses.

 

 

item D Vous pouvez tester séparément les Ac Cp et CL3, par immunocytochimie, avec des Ig de lapin anti-IgG de souris marquées à la phosphatase alcalin Vrai

 

--> Je vois pas l’intérêt de faire ça avec Cp sachant qu’il est cytoplasmique, ça n’apporte rien. La phosphatase alcaline ne traverse pas les membranes non ?

 

item E Sur un même échantillon, vous pouvez utiliser un mélange de Cp et QD, en immunofluorescence indirecte, avec des Ig de chèvre anti-IgG de souris marquées à la fluorescéine et des Ig de chèvre anti-IgG de rat marquées à la rhodamine Vrai

 

--> Idem ici, Cp ne sera pas marqué puisqu’on se trouve pas en conditions dénaturantes.  Si Cp avait été membranaire ça aurait été vrai puisque les couleurs sont différentes, mais là on détecte uniquement QD ?

 

Enoncé QCM 7

 

Révélation

 

 Vous avez montré par des techniques adaptées que :

-  Cp ne marque que les cellules cancéreuses (marquage de type « cytoplasmique »),

-  CL3 marque les cellules cancéreuses (marquage de type « membranaire »),

-  QD ne reconnait que les cellules du parenchyme (marquage de type « membranaire »)

 

On cherche désormais à détecter spécifiquement la présence de cellules cancéreuses dans le parenchyme pulmonaire de ces patientes, avec une très grande sensibilité :

 

 

item C : Vous pouvez enrichir les prélèvements de parenchyme des patientes en cellules cancéreuses, en utilisant des billes magnétiques revêtues de CL3, puis réaliser une étude immunocytochimique des cellules triées, en immunofluorescence indirecte, avec Cp et un anticorps secondaire adapté Vrai

Là pour moi il y a double problème :

1 - On ne nous précise pas qu’on se trouve en conditions dénaturantes ; donc trier avec Cp n’est pas possible

 

2- Si on était en condition dénaturantes et qu’on avait accès au cytoplasme, ça ne répondrait pas à l’objectif qui est de détecter les cellules cancéreuses de la patiente (et jusqu’à preuve du contraire, elle ne possède pas de cellules coupées et ayant subit une inclusion dans son corps ou alors y’a un ptit soucis)

 

Donc je vois pas pourquoi on valide l’item  

Enoncé QCM 9

 

Révélation

On cherche à doser un antigène (Ag) dans le sérum d'un patient. On dispose pour cela d'un anticorps monoclonal (AcMc) spécifique de l'Ag, d'anticorps couplés à une enzyme (Ac) et capables de reconnaître l'Ag, ainsi que de supports où l'on peut fixer, soit l'Ag recherché, soit un Ac le reconnaissant

 

Item C : On pourra faire un dosage non compétitif avec des Ac marqués spécifiques de l'Ag, incubés dans un premier temps avec les Ag à doser en phase liquide. Puis les Ac non complexés aux Ag libres se complexeront dans un second temps avec l'Ag préalablement fixé à un support solide. L'activité enzymatique de l'Ac sera inversement proportionnelle à la quantité d'Ag à doser  Vrai

 

On fait un dosage non compétitif dans la première partie mais je saisis pas quel est le but de la seconde partie (soulignée) ? Pourquoi voudrait-on savoir ce que deviennent les Ac non complexés ? (y’a moyen que ce soit le dosage non compétitif que j’ai pas bien saisis aussi )

 

Merciii beaucoup 

Edited February 17, 2020 by Liliputienne

[Metallica]

Bien le bjr @Liliputienne

 

 

il y a 9 minutes, Liliputienne a dit :

item B Vous pourrez détruire les cellules cancéreuses de la moelle osseuse grâce à des anticorps Me couplés à un radio-isotope de haute énergie" Vraie

 

--> On part du principe que vu que Me ne présente aucune réaction croisée il n’y a pas de risque que la radioactivité aille ailleurs et finisse par tuer le patient ? (ce qui serait balo vu qu’on essaye de le soigner quand même)

 

C'est bien ça !   Dans ce genre de manip , c'est tjrs important de vérifier que l'on se focalise bien sur ce que l'on veut détruire

 

 

il y a 15 minutes, Liliputienne a dit :

item D Vous pouvez tester séparément les Ac Cp et CL3, par immunocytochimie, avec des Ig de lapin anti-IgG de souris marquées à la phosphatase alcalin Vrai

 

--> Je vois pas l’intérêt de faire ça avec Cp sachant qu’il est cytoplasmique, ça n’apporte rien. La phosphatase alcaline ne traverse pas les membranes non ?

 

Effectivement il est cytoplasmique et il est aussi dit que l'on faisait réagir cet Ac sur un échantillon de cellules cancéreuses mais il n'est pas vraiment sous-entendu qu'on devait laisser les cellules intactes....

En utilisant un agent perméabilisant ( qui permettra de laisser passer l'Ac qui normalement ne passe pas ) ou une solution hypotonique ( qui permettrait de recupérer le cytoplasme des cellules cancéreuses) on pourra effectuer ce test. Ça serait d'ailleurs logique que l'on fasse ça puisque l'on cherche à vérifier si la description commerciale de l'Ac est correcte (mais le qcm manque pas mal de précision à ce niveau là c'est vrai).

 

 

il y a 37 minutes, Liliputienne a dit :

--> Idem ici, Cp ne sera pas marqué puisqu’on se trouve pas en conditions dénaturantes.  Si Cp avait été membranaire ça aurait été vrai puisque les couleurs sont différentes, mais là on détecte uniquement QD ?

 

Là aussi en utilisant les techniques citées au dessus , on peut arriver à ce résultat

 

il y a une heure, Liliputienne a dit :

item C : Vous pouvez enrichir les prélèvements de parenchyme des patientes en cellules cancéreuses, en utilisant des billes magnétiques revêtues de CL3, puis réaliser une étude immunocytochimique des cellules triées, en immunofluorescence indirecte, avec Cp et un anticorps secondaire adapté Vrai

 

Ce qu'ils veulent dire , c'est qu'en utilisant la cytofluorométrie ,on pourra séparer les cellules du parenchyme des cellules cancéreuses , en révélant ces dernières grâce à l'Ac Cp ( tjrs en utilisant des techniques d'accessibilité au cytosol) et en soit ça permettra de détecter des cellules cancéreuses initialement présentes dans le parenchyme puisque l'on a effectué une révélation après un tri cellulaire. 

 

Révélation

Par contre le terme "enrichir"dans l'item a rien à faire là il contredit complètement le reste de l'item

 

 

il y a une heure, Liliputienne a dit :

1 - On ne nous précise pas qu’on se trouve en conditions dénaturantes ; donc trier avec Cp n’est pas possible

 

Les billes magnétiques permettant le tri ,sont fixées sur CL3 donc on n'a pas besoin de Cp dans le cas présent

 

 

Il y a 1 heure, Liliputienne a dit :

Item C : On pourra faire un dosage non compétitif avec des Ac marqués spécifiques de l'Ag, incubés dans un premier temps avec les Ag à doser en phase liquide. Puis les Ac non complexés aux Ag libres se complexeront dans un second temps avec l'Ag préalablement fixé à un support solide. L'activité enzymatique de l'Ac sera inversement proportionnelle à la quantité d'Ag à doser  Vrai

 

 

Celui-là je comprends pas pourquoi il serait compté vrai parce qu'on nous dit que c'est un dosage non compétitif d'un coté et de l'autre que l'activité enzymatique sera inversement proportionnelle ce qui est contradictoire étant donné qu'il n'y a pas de compétition vis-à-vis de l'espèce à doser

 

En espérant t'avoir aidée

 

 

 

 

 

 

[Liliputienne]

Il y a 2 heures, Metallica a dit :

Effectivement il est cytoplasmique et il est aussi dit que l'on faisait réagir cet Ac sur un échantillon de cellules cancéreuses mais il n'est pas vraiment sous-entendu qu'on devait laisser les cellules intactes....

En utilisant un agent perméabilisant ( qui permettra de laisser passer l'Ac qui normalement ne passe pas ) ou une solution hypotonique ( qui permettrait de recupérer le cytoplasme des cellules cancéreuses) on pourra effectuer ce test. Ça serait d'ailleurs logique que l'on fasse ça puisque l'on cherche à vérifier si la description commerciale de l'Ac est correcte (mais le qcm manque pas mal de précision à ce niveau là c'est vrai).

 

Globalement je suis d'accord avec ce que tu dis, c'est juste que dans l'idée du QCM je trouvais ça un peu flou. Bon après c'est pas grave, mais j'avais juste besoin de savoir si j'étais justement trop pointilleuse ou si c'était que la formulation était pas assez explicite. 

 

Il y a 2 heures, Metallica a dit :

Les billes magnétiques permettant le tri ,sont fixées sur CL3 donc on n'a pas besoin de Cp dans le cas présent

C'est pour la "deuxième partie" de l'expérience que je parlais de Cp

 

Il y a 2 heures, Metallica a dit :

Celui-là je comprends pas pourquoi il serait compté vrai parce qu'on nous dit que c'est un dosage non compétitif d'un coté et de l'autre que l'activité enzymatique sera inversement proportionnelle ce qui est contradictoire étant donné qu'il n'y a pas de compétition vis-à-vis de l'espèce à doser

Nice t'as la même question que moi ahah bon du coup j'attends qu'un tuteur/RM passe par là  

 

Révélation

Il y a 2 heures, Metallica a dit :

 

 

Révélation

Ze come back, ça fait plaisir tout plein 

 

 

[Metallica]

il y a 7 minutes, Liliputienne a dit :

Globalement je suis d'accord avec ce que tu dis, c'est juste que dans l'idée du QCM je trouvais ça un peu flou. Bon après c'est pas grave, mais j'avais juste besoin de savoir si j'étais justement trop pointilleuse ou si c'était que la formulation était pas assez explicite. 

 

Un peu des 2 j'imagine

 

il y a 7 minutes, Liliputienne a dit :

Nice t'as la même question que moi ahah bon du coup j'attends qu'un tuteur/RM passe par là  

 

Yup dans tous les cas c'est bien de  comprendre toutes les notions concernant le dosage compétitif mais ça ne fait jamais l'objet de qcm

Edited February 17, 2020 by Metallica

[Liliputienne]

il y a 5 minutes, Metallica a dit :

Yup dans tous les cas c'est bien de  comprendre toutes les notions concernant le dosage compétitif mais ça ne fait jamais l'objet de qcm

J'avais jamais fais gaffe à ça ! Y'a des techniques privilégiées, c'est injuste #balancetatechnique 

[LaRateATouille]

Salut,

Voilà le sujet du QCM 3, qui fait l'objet de ma question:

 

"QCM 3 : On souhaite procéder à une purge médullaire suivie d'une autogreffe de la moelle osseuse purgée. Pour cela on recherche des méthodes permettant d’éliminer toutes les cellules métastatiques des prélèvements de la moelle osseuse afin qu’elle lui soit réinjectée.
De plus, il a été démontré que le cancer serait lié à une hypersécrétion de cytokines prolifératives de la famille des interleukines nommées Il-X. On connaît un anticorps spécifique de l'Il-X nommé R33. On dispose aussi d'un anticorps monoclonal nommé Tr4, spécifique d'une protéine intracellulaire présente chez toutes les cellules sécrétrices de l'Il-X."

 

D. Si, après marquage de Tr4 avec l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC) et de Me par la rhodaine, on trouve en cytofluorométrie des cellules co-marquées, on peut dire que les métastases sécrètent l'Il-X.

 

Petite question par rapport à l'item D : je ne comprends pas pourquoi l'item est compté faux (dans la correction, il est écrit: " La cytofluorométrie repose sur l'utilisation d'anticorps membranaires. Or, Tr4 est un anticorps anti protéine intracellulaire.") parce que dans le cours nous avons vu que la cytofluorométrie est utilisé pour repérer des antigènes membranaire et des antigènes intracellulaire (si perméabilité réalisée préalablement).

 

Cet item est-il faux car l'énoncé ne présente pas de perméabilisation, et donc que la cytofluorométrie est spécifique des antigènes membranaires ?

 

Merci d'avance. 

 

LaRateATouille.

 

 

 

 

 

 

 

[Liliputienne]

@LaRateATouille Tu veux réaliser une auto-greffe, donc perméabiliser les cellules n’auraient qu’assez peu d’intérêt (puisque dans l’organisme les cellules sont entières). Donc ici la cytofluorométrie repose sur la détection des Ac membranaires. 

[LaRateATouille]

il y a 8 minutes, Liliputienne a dit :

@LaRateATouille Tu veux réaliser une auto-greffe, donc perméabiliser les cellules n’auraient qu’assez peu d’intérêt (puisque dans l’organisme les cellules sont entières). Donc ici la cytofluorométrie repose sur la détection des Ac membranaires. 

D'accord mais du coup la technique de cytofluorométrie n'est pas spécifique à la détection d'Ag membranaires, on peut aussi l'utiliser pour détecter des Ag cytosolique non ?

[Liliputienne]

Hmm il me semble qu'on peut uniquement détecter des Ag membranaires mais j'ai peur de dire une bêtise là ( @Reïner t'es plus qualifié pour la question) 

[Reïner]

Il y a 7 heures, Liliputienne a dit :

Hmm il me semble qu'on peut uniquement détecter des Ag membranaires mais j'ai peur de dire une bêtise là

 

Le 21/02/2020 à 10:57, LaRateATouille a dit :

D'accord mais du coup la technique de cytofluorométrie n'est pas spécifique à la détection d'Ag membranaires, on peut aussi l'utiliser pour détecter des Ag cytosolique non ?

 

Les deux ! mais pour les cytosoliques il faudra préalablement perméabiliser les cellules

Edited February 22, 2020 by Reïner

[LaRateATouille]

Il y a 3 heures, Reïner a dit :

 

 

Les deux ! mais pour les cytosoliques il faudra préalablement perméabiliser les cellules

c'est ce qu'il me semblait, parfois merci beaucoup à vous deux vous êtes des chefs !  @Liliputienne @Reïner

[Metallica]

Re @Liliputienne

 

Le 17/02/2020 à 18:16, Metallica a dit :

Le 17/02/2020 à 16:13, Liliputienne a dit :

Item C : On pourra faire un dosage non compétitif avec des Ac marqués spécifiques de l'Ag, incubés dans un premier temps avec les Ag à doser en phase liquide. Puis les Ac non complexés aux Ag libres se complexeront dans un second temps avec l'Ag préalablement fixé à un support solide. L'activité enzymatique de l'Ac sera inversement proportionnelle à la quantité d'Ag à doser  Vrai

 

 

Celui-là je comprends pas pourquoi il serait compté vrai parce qu'on nous dit que c'est un dosage non compétitif d'un coté et de l'autre que l'activité enzymatique sera inversement proportionnelle ce qui est contradictoire étant donné qu'il n'y a pas de compétition vis-à-vis de l'espèce à doser

 

Juste pour rajouter ce petit sujet qui a déjà  traité de cette question (et qui a l'air de confirmer que cet item n'a pas trop de sens)

 

 

Edited February 24, 2020 by Metallica

[LaRateATouille]

Salut, 

 

J'ai une petite question par rapport au QCM 15 item E: comment peut-on affirmer qu'il s'agit d'un épitope séquentiel de P1 et non pas d'une autre protéine ?

 

Sujet commun aux QCM 14 à 16:

 

Vous travaillez sur une souche bactérienne sauvage « Pacesia coli » (Pc), pathogène pour l’Homme et la souris.
Il existe 3 formes atténuées (différentes de Pc) dénommées « Pa1 » « Pa2 » et « Pa3 ».
Vous souhaitez utiliser les souches atténuées pour vacciner vos patients et induire une immunité efficace contre la souche Pc.

Les bactéries Pacesia coli expriment 3 protéines P1, P2 et P3, de respectivement 70, 45 et 25 kDa.
Vous vaccinez des souris avec des extraits protéiques de Pa1, Pa2 ou Pa3.
Vous souhaitez mettre en évidence la production d'anticorps chez les animaux vaccinés.

Vous possédez un extrait protéique « Pc » contenant les protéines P1 P2 et P3.

 

QCM 15. Vous souhaitez identifier les antigènes présents dans les différentes souches bactériennes (Pc, Pa1, Pa2 et Pa3) partir d’une souris infectée par la souche Pc, vous avez produit un antisérum et 3 anticorps monoclonaux, ACm1, ACm2 et ACm3. Vous réalisez un immuno-transfert Sur les extraits protéiques de chaque souche bactérienne avec ces anticorps [On considère que les bandes de 70, 45 et 25 kDa, correspondent respectivement uniquement aux protéines P1, P2 et P3 de la bactérie Bs]

Voici les résultats:

E. L'ACm2 reconnaît un épitope séquentiel de P2.

[Metallica]

il y a 47 minutes, LaRateATouille a dit :

J'ai une petite question par rapport au QCM 15 item E: comment peut-on affirmer qu'il s'agit d'un épitope séquentiel de P1 et non pas d'une autre protéine ?

 

La correction s'est plantée c'est bien P3 que reconnait l'ACm2 et pour répondre à ta question l'ACm2 permet d'afficher une bande à 25kDa , Pm correspondant à celui de P3 ce qui est logique vu  que c'est ce peptide qui a permis sa synthèse. Après il n'est pas impossible qu'il y ait une réaction croisée avec une autre protéine de 25kDa ce qui ne serait pas évident à repérer sur l'immunotransfert mais c'est très peu probable car non seulement il faudrait que ça soit comme par hasard une protéine ayant pile poil un PM de 25kDa mais en plus qu'elle soit présente sur toutes les souches. De toute manière, réaction croisée ou pas , le peptide P3 sera reconnu !

[LaRateATouille]

Il y a 8 heures, Metallica a dit :

 

La correction s'est plantée c'est bien P3 que reconnait l'ACm2 et pour répondre à ta question l'ACm2 permet d'afficher une bande à 25kDa , Pm correspondant à celui de P3 ce qui est logique vu  que c'est ce peptide qui a permis sa synthèse. Après il n'est pas impossible qu'il y ait une réaction croisée avec une autre protéine de 25kDa ce qui ne serait pas évident à repérer sur l'immunotransfert mais c'est très peu probable car non seulement il faudrait que ça soit comme par hasard une protéine ayant pile poil un PM de 25kDa mais en plus qu'elle soit présente sur toutes les souches. De toute manière, réaction croisée ou pas , le peptide P3 sera reconnu !

ah ok s'il s'agit de la protéine P3 je comprends tout de suite beaucoup mieux, merci à toi @Metallica t'es une/un chef, bonne journée !