billes de sépharose revêtues de protéine A de staphylocoque

[LaRateATouille]

Bonsoir,

Dans le poly de recherche, la notion d'immunoprécipitation est évoquée. Dans cette partie (page 25), on évoque la technique en présentant la protéine A de staphylocoque recouvrant la bille de sépharose. Je n'ai pas très bien compris le rôle de ces billes dans la réalisation de cette technique. Si quelqu'un aurait l'amabilité de m'expliquer ce serrait top !

 

LaRateATouille.

[Metallica]

Salut @LaRateATouille

 

Le 10/02/2020 à 18:47, LaRateATouille a dit :

le rôle de ces billes

 

La bille en question est plus lourde que le reste du complexe donc si tu la couples à une protéine (A) qui elle est capable de se fixer au fragment Fc de l'Ac qui lie ton Ag d’intérêt, tu vas pouvoir utiliser une ultracentrifugation qui va faire en sorte de séparer les molécules selon leur densité. Ton complexe Ag-Ac-protéineA-bille va se retrouver au fond de l'échantillon , tu pourras ainsi l'isoler du reste de l'échantillon. Après tu procèdes à une étape de lavage pour dissocier l'Ag du reste du complexe ( celui qui t’intéresse de base ) . Après ça , tu fais migrer indépendamment : ton échantillon de base , des marqueurs de tailles , l'Ag qui t’intéresse et ensuite tu révèles le tout soit par autoradiographie si tu as préalablement marqué tout ton échantillon avec des marqueurs radioactifs soit tu utilises une électrophorèse suivie d'une immunodétection. Après tout ça , tu pourras récolter des infos sur l'Ag genre son PM , ses potentiels épitopes conformationnels (et séquentiels aussi) chose que tu ne pouvais pas faire avec un simple immunotransfert

 

Edited April 18, 2020 by Metallica

[LaRateATouille]

Il y a 11 heures, Metallica a dit :

Salut @LaRateATouille

 

 

La bille en question est plus lourde que le reste du complexe donc si tu la couples à une protéine (A) qui elle est capable de se fixer au fragment Fc de l'Ac qui lie ton Ag d’intérêt, tu vas pouvoir utiliser une ultracentrifugation qui va faire en sorte de séparer les molécules selon leur densité. Ton complexe Ag-Ac-protéineA-bille va se retrouver au fond de l'échantillon , tu pourras ainsi l'isoler du reste de l'échantillon. Après tu procèdes à une étape de lavage pour dissocier l'Ag du reste du complexe ( celui qui t’intéresse de base ) . Après ça , tu fais migrer indépendamment : ton échantillon de base , des marqueurs de tailles , l'Ag qui t’intéresse et ensuite tu révèles le tout soit par autoradiographie si tu as préalablement marqué tout ton échantillon avec des marqueurs radioactifs soit tu utilises un immunotransfert suivi d'une immunodétection. Après tout ça , tu pourras récolter des infos sur l'Ag genre son PM , ses potentiels épitopes conformationnels (et séquentiels aussi) chose que tu ne pouvais pas faire avec un simple immunotransfert

 

Merci beaucoup, tout est bien plus clair maintenant! 

Bonne soirée @Metallica !