Immuno Rangueil 2014 - QCM 5

[Leïlaa]

Bonjour !

Je me suis complètement trompé à la question 5, j'aimerai bien avoir les justifications des réponses si c'est possible ^^

Je vous mets tout l'énoncé au cas où, désolée pour la longueur du coup...

 

Révélation

-> Réponses justes : ABDE

 

Merci à la personne qui prendra le temps de m'aider 

[Metallica]

Salut @Leïlaa

 

A--> c'est bien vrai car l'on voit bien qu'après immunotransfert , l'AS reconnait la partie non clivée de TAT (présente sur les cellules pancréatiques cancéreuses) c'est à dire celle ayant un PM de 175kDa. VRAI

 

 B ---> Pour qu'un dosage par ELISA sandwich puisse fonctionner , il faut que deux Ac reconnaissent deux épitopes (de préférence différents) présents sur la molécule que l'on cherche à doser. Ici , on cherche à doser la forme de 400kDa, forme clivée se retrouvant dans le sérum. Parmi les Ac proposés dans l'item , on sait grâce à l'immunotransfert des cellules C que  l'Ac1 reconnait un épitope séquentiel présent sur la forme de 400kDa donc c'est nickel ! Reste maintenant à voir si l'Ac2 reconnait également un épitope sur cette forme de 400kDa. On sait déjà grâce à l'immunotransfert ( ou immunoempreinte) que peu importe la forme que reconnait Ac2  , il reconnaitra forcément un épitope conformationnel (si tant est qu'il reconnaisse bien un épitope) puisqu'il n'y a aucune bande détectée pour cet Ac2. Cependant le DOT-BLOT des cellules N et C nous donne la certitude que l'AC2 reconnait un épitope conformationnel.ll ne reste plus qu'à savoir quelle forme reconnait l'Ac2. Cette information nous ait donnés sur la partie sécrétome du DOT-BLOT des cellules C. On voit qu'il y a un signal pour l'Ac2 associée aux protéines du sécrétome or on sait  d'après les bandes révélées  par l'AS et AC1 (en immunotransfert sur les cellules C) que c'est bien la forme de 400kDa qui est dans le sécrétome..on peut donc en conclure que l'AC2 reconnait un épitope conformationnel sur la forme de 400kDa. On sait maintenant que c'est 2 Ac reconnaissent bien deux épitopes différents ( l'un séquentiel l'autre conformationnel ) présents sur la forme de 400kDa, le dosage par ELISA sandwich pourra bien se faire. VRAI

 

C--->L'antisérum reconnait les formes de 575kDa et de 175kDa , les deux résidus membranaires respectivement présents chez les cellules normales et chez les cellules cancéreuses, à partir de là , il ne sera pas possible de distinguer les cellules normales des cancéreuses puisque cet AS cible les deux types cellulaires. FAUX 

 

D---> L'AC1 reconnait la forme de 575kDa aussi bien  chez les cellules pancréatiques saines que chez les cellules cancéreuses  (et reconnait également la forme sécrétée de 400kDa mais cette forme n'est ici pas intéressante dans le cadre d'une cytofluorométrie qui s’attarde sur les Ag membranaires). On sait également que les cellules pancréatiques normales ne circulent pas. Sachant ceci , il est désormais possible de détecter précisément et sans erreur la présence de cellules cancéreuses circulantes grâce à l'utilisation de l'Ac1 dans le cadre d'une cytofluorométrie. VRAI

 

E--->Ici on va réutiliser les données obtenues dans l'item B .On cherche à mettre en évidence via la technique ELISpot , les cellules cancéreuses circulantes sécrétrices d'un Ag ( forme de 400kDa). On sait que Ac1 et Ac2 reconnaissent deux épitopes différents présents sur la forme de 400kDa. A partir de là ,on peut mettre en place un ELISpot répondant aux objectifs énoncés dans l'item: 

-On fixe d'abord l'un des 2 Ac sur support solide 

-on introduit ensuite les cellules cancéreuses qui vont sécréter la forme de 400kDa qui se fixera sur l'Ac fixé sur le support

-On lave afin d'éliminer le surnageant et les cellules sécrétrices.

-On utilise le deuxième Ac laissé de coté mais cette fois ci couplé à une enzyme ou à un fluorochrome qui laissera deviner de par les spots de signaux crées, la présence des cellules sécrétrices avant lavage. VRAI

 

Voilou

 

[Leïlaa]

Salut @Metallica merci pour cette réponse !!

 

Le 10/02/2020 à 17:53, Metallica a dit :

A--> c'est bien vrai car l'on voit bien qu'après immunotransfert , l'AS reconnait la partie non clivée de TAT (présente sur les cellules pancréatiques cancéreuses) c'est à dire celle ayant un PM de 175kDa. VRAI

 

Cependant je ne comprends pas comment tu peux savoir que la protéine de 175kDa est la partie non clivée... j'aurais tendance à dire que c'est celle de 575 moi...

 

 

 

[Metallica]

@Leïlaa

 

La protéine de 575kDa correspond à la forme décrite ici :

 

 

C'est cette forme qui va subir le clivage et donner un peptide de 175kDa et un autre de 400kDa. On sait que la forme de 400kDa est présente dans le sécrétome donc forcément ça sera la forme de 175kDa qui sera membranaire

 

 

 

[Leïlaa]

Okkk merci @Metallica