HGPRR

[carolineb]

Salut! J’ai pas trop compris le fait qu’on fusionne des cellules spléniques avec des cellules de myélome porteur d’une mutation HGPRT

si on fait ça comment on peut obtenir des hybrides qui possèdent de l’HGPRT?

merci d’avancee 

[Théobromine]

Que ne comprend tu pas exactement? Effectivement, on fusionne des cellules spléniques avec des cellules de myélome porteur d’une mutation HGPRT, du coup l'hybride obtenu (qui est un mélange des deux cellules) possède la mutation HGPRT de la cellule de myélome!

[carolineb]

@Théobromine ah d'accord! En fait je pensais que quand elle disait "possède HGPRT" c'était l'enzyme et pas la mutation

du coup quand on dit que l'hybride est HGPRT + c'est qu'il possède la mutation?

[OxyGenS]

@Théobromine @carolineb

J'ai compris que le myélome malin est HGPRT-, que le lymphocyte est HGPRT+ et que l'hybride est HGPRT+

Du coup l'hybride n'hérite pas du HGPRT du myélome ??

Si l'hybride était HGPRT- aussi, il serait tué dans le milieu sélectif HAT

[carolineb]

Les cellules de myélome malin sont porteuses d'une mutation HGPRT - 

donc elles meurent en présence d'HAT avec l'aminoptérine

et les lymphocytes sont HGPRT + tout comme les hybrides 

donc ouais je suis d'accord avec toi c'est ça qui m'a bloquée, pq les hybrides seraient HGPRT + alors que les cellules myélomateuse sont HGPRT -?

[Ratus]

La première réponse était assez imprécise, mais pas fausse dans le fond.

Les cellules myélomateuse sont HGPRT- donc meurent en présence d'aminopirétine.

MAIS, lorsqu'elles fusionne avec les lymphocytes, qui elles sont HGPRT+, la cellule obtenue est HGPRT+ car c'est comme si on faisait rouge + pas de couleur = rouge

Donc les hybrides sont HGPRT+ parce que les lymphocytes l'étaient et que les cellules myélomateuses ne l'étaient pas! (Ce qui est très important, car ainsi on peut faire la double sélection, en supprimant toutes les cellules qui n'ont pas fusionné comme on le souhaite)

C'est plus clair comme ça?

[carolineb]

@Ratus oui niquel merci beaucoup! 

[carolineb]

@Ratus salut! je reviens sur le sujet pcq je ne comprends pas trop pourquoi les lymphocytes non fusionnés meurent en culture alors qu'ils sont HGPRT +?

[Liliputienne]

il y a une heure, carolineb a dit :

je ne comprends pas trop pourquoi les lymphocytes non fusionnés meurent en culture alors qu'ils sont HGPRT +

Elle le précise pas, simplement il faut retenir que si tes lymphocytes ne fusionnent pas ils meurent. Si ils fusionnent ils permettent la survie des hybridomes par la présence de HPGRT 

[carolineb]

@Liliputienne ok merci!

[Ratus]

Le 22/02/2020 à 22:18, carolineb a dit :

@Ratus salut! je reviens sur le sujet pcq je ne comprends pas trop pourquoi les lymphocytes non fusionnés meurent en culture alors qu'ils sont HGPRT +?

Ils meurent parce qu'ils n'ont pas de capacité de prolifération illimité, contrairement aux cellules myélomateuses! (D'ailleurs c'est pour ça qu'on les fusionne!)