Vecteur

[EmmaTOM]

Holaaaa, est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer ce type d'exercice? Parce que même avec mon cours et le TAT j'ai du mal à comprendre

file:///D:/PACES/S2/UE8/Tronc%20commun/UE%208%20_%20Recherche%20Rangueil%202018-2019.pdf

(je peux toujours pas mettre de photos, c'est le 7 et 8  )

 

 

Mercii d'avance

[Puromycine]

Salut !

 

Je n'arrive pas à accéder à ton lien. Est-ce que tu parles des questions 7 et 8 du TD qu'il y a sur moodle, ou est-ce une annale disponible sur tutoweb ?

 

Désolé de pas te répondre directement

[EmmaTOM]

@Puromycine

Non du tout ahah, c’est dans le poly du tat du coup page 16 je crois

 

désolée  pour le lien

[Puromycine]

T'inquiète, c'est pas un soucis ^^

 

Alors, pour faire ces exercices, je prenais toujours du temps avant de lire les items pour surligner les séquences "inter-coupure" commune.

 

Déjà, il faut que les  enzymes de restrictions coupent en bout cohésif : donc AccIII n'as pas grande utilité. En effet, si on coupe avec des bouts cohésif, c'est pour le replacer au bon endroit dans le vecteur.

 

Ici , ça donne :

 

NcoI : C/CATGG

PaeI : GCATG/C

NlaIII CATG/X (je rajoute des X car sinon ça me perturbe, j'ai un cerveau bizarre je sais ^^')

SunI C/GTACG

FatI : X/CATG

Acc651 : G/GTACC

 

Comme les enzymes de restriction sont des palindrome, la séquence complémentaire sera la même y compris dans le bout cohésif : tu peux ainsi coller un bout cohésif de NcoI sur un bout cohésif de FatI !

Attention, il faut que les bouts cohésif soit de même sens : raison pour laquelle, NcoI ne s'insère pas sur PaeI l'un coupe proche de 5', l'autre proche de 3'.

 

Une fois que j'ai fait ça, je marquais avec un crois rouge (pour que ça se voit bien) toutes les enzymes qui étaient entre l'ATG et le codon STOP : en effet, il ne faut pas utiliser ces enzymes avec l'insert (on pourra les utiliser sur le promoteur). Si on l'utilise sur l'insert, on coupe la séquence, et on en perd l’intérêt !

 

Enfin, je surligne des même couleurs les enzymes aux bouts cohésif commun sur l'insert et le promoteur (ici, j'aurais mis en violet NcoI, en orange PaeI, ...)

 

Maintenant, je regardais les items (avec le code couleur ça va aller vite - je te joint l'image pour que tu vois comment je procède)

 

QCM 7 :

A  : si on digère l'insert avec du violet et du orange, et le plasmide avec du violet et du orange, on peut obtenir  un insert qui se met dans un sens, ou l'autre.

En terme terme "scientifique", ça donne : si on digère l'insert avec NcoI et PaeI, et le plasmide avec PaeI et FatI, l'insert s'insère dans un sens, et lorsque l'on digère le plasmide avec FatI et NlaIII, il s'insère dans l'autre. (a noter que ça marche avec d'autre combinaison)

PS : si l'insert s'insère dans les deux sens, il ne sera pas pour autant exprimé ! Il faut donc, en théorie, choisir ses enzymes pour que le brin codant soit en face du brin codant du vecteur.

 

B : VRAI : l'opération a permis de désensibiliser les bactéries à la pénicilline, donc en utilisant la pénicilline, on sélectionne bien les bactéries dans lesquelles le plsamides s'est inséré.

 

C : FAUX : Là, on va jouer avec les couleurs : Dès les premiers mots, je sais que c'est faux, car ils utilisent deux "oranges" (PaeI et NlaII) alors que sur l'insert, il n'y a qu'un seul orange. La suite vient nous confirmer vu que Acc651 est bleu (donc le bout cohésif est différent)

 

D :  Rappel : le gènre LacZ code la β-galactosidase. La réaction enzymatique de la β-galactosidase en présence de galactose colore la bactérie en bleue. Or le gène LacZ est apporté par l'insert comme tu peux le voir sur le schéma (mais est absent du plasmide). Donc, une bactérie colorée en bleue est une bactérie recombinante.

 

E : Je m'en souvenais  plus, je fais confiance au tutorat (mais j'ai pas vu ce genre de question en concours)

 

 

QCM 8 :

 

A : Faux, il pourra pas s'insérer tout court : bleu et orage d'un côte, orange et orange de l'autre, c'est pas compatible

 

B : Bleu et orange d'un côté, bleu et orange de l'autre, il manque plus qu'à regarder combien de sens sont possible. Ici, on remarque que seul un sens est possible. Donc c'est faux (c'est très rare que ça puisse s'insérer dans les deux sens).

 

C : Voir B

 

D : Quand tu lis qu'on utilise deux vecteurs du même coté du promoteur, c'est faux, nécessairement. Donc ici, quand tu lis "La totalité de l'insert digéré par NcoI et Acc651", tu peux t’arrêter, c'est faux. En effet il faut que le gène soit inséré en entier dans le plasmide : donc il faut une coupure avant le ATG et une coupure après le codon STOP.

 

E : Effectivement, ça rentre dans le plasmide, ceci dit, je ne comprends pas en quoi c'est vrai... Pour commencer, si c'est une question de sens la digestion de l'inert pat NcoI et PaeI et du plasmide par FatI et PaeI permet aussi une insertion dans le bon sens... A moins que je n'est loupé une information, .... Aussi, il manque le sens du vecteur a proximité des différent sites de restrictions... Spontanément, j'aurais plutôt mis l'inverse...

Bref, j'ai surement loupé une info, ou alors je me trompe...

 

J'espère avoir pu t'aider.

Je sais que ma méthode est très bizarre. ça m'a aidé en doublant. Je sais pas si j'ai bien expliqué ou non (j'explique très mal....). Et s'il te reste la moindre zone d'ombre sur ces QCM, relance moi !

 

En attendant, bon courage pour le S2 !

[Théophylline]

C'est bon pour toi @LucileMacBernik ? 

[EmmaTOM]

@Puromycine @Théophylline

alors merci de tes explications (j’ai mis un moment à répondre, désolée)!! Mais y a quelque truc que j’ai encore du mal à bien comprendre

 

J’irais à la permanence la semaine prochaine hihi 

[Théophylline]

Il y a 9 heures, LucileMacBernik a dit :

J’irais à la permanence la semaine prochaine hihi

 

Pas de soucis !!