Marquage radioactif et méthode d'amorçage au hasard

[Alanna31]

Bonjour, voilà, la méthode d'amorçage au hasard utilise du dNTP radiocatif sur le Palpha (ex: alpha32P CTP) or je pensais qu'on ne pouvait pas faire de marquage radioactif le phosphate alpha mais seulement sur le phosphate gamma. Est-ce que je montre du coup ? Ou si j'ai en partie raison dans quel cas utilise t-on du phosphate gamma ou du phosphate alpha ? 

 

 

[mathltr]

Coucou ! 

Alors en fait faut que tu fasses attention , c'est différent en fonction de la méthode que t'utilise :

- amorçage au hasard tu vas utiliser le phosphate radioactif alpha (parce que tu INTÈGRES dans ton brin le nucléotide radioactif donc c'est comme quand t'insère une base normale tu gardes le phosphate alpha et le beta et gamma partent [PPi])

- marquage des extrémités  avec la polynucléotide kinase, tu vas utiliser le phosphate radioactif gamma, parce que la tu vas pas intégrer la base mais juste rajouter un phosphate marqué au bout de ton brin, donc tu prends le 1er phosphate dispo en gros du coup c'est le gamma

 

c'est plus clair pour toi ? 

[Alanna31]

Oui c'est bon j'ai compris merci

[Guest Phosphate gamma]

Salut, ma remarque peut peut-être sembler stupide, mais pour moi, même si on se trouve aux extrémités des brins, le phosphate gamma sera "éliminé" sous la forme de PPi pour avoir un dNMP non ? Dans ma tête en gros c'est le PPi qui est radioactif et pas l'ADN ! Où est-ce que j'ai faux ?!