Plusieurs questions cours/annales

[cutieheartx]

Bonsoir tout le monde, 

 

J'ai des petits soucis avec quelques notions de cours mais aussi un item de QCM d'annale. Merci pour ceux qui prendront le temps de me répondre !! 

 

1ère question : Qu'est ce que la transgénèse aléatoire ? Est-ce qu'elle correspond à mettre des mutations aléatoirement sur une séquence d'ADN pour voir quelles régions de l'ADN  sont importantes ? 

 

2ème question : Dans quels cas je dois utiliser le promoteur de la T7 ARN polymérase ? Et celui du Cytomégalovirus SV40 ? Quelles sont leurs différences ? 

 

3ème question : Dans quel cas la déphosphorylation de mon plasmide une fois que je l'ai digéré avec des enzymes est-elle indispensable ? Parce que dans certains qcms c'est compté vrai, dans d'autres non et je comprends pas trop la raison 

 

4ème question (annale 2016 QCM 1 item C) :  (je n'ai pas réussi à mettre la photo du QCM entier,  c'est mieux de voir l'énoncé en entier) 

 L'image ci-dessous c'est la séquence codante du gène lac z . Le site de reconnaissance d'EcoRI est : GAATTC (qui coupe après le premier A) 

 

L'item C est : "Le début de la séquence du fragment contenant l'ADNc complet de rat cloné dans le site EcoRI peut-être : "

Je vois bien le début de la séquence EcoRI mais je comprends pas d'où sors le reste de la séquence ? 

 

5ème question : Pourquoi cet item est faux : " La raison majeure pour laquelle le système Crispr/Cas9 est en train de supplanter le système ZFN est qu'il est beaucoup plus simple pour cibler une séquence du génome de synthétiser à façon un ARN que de produire des protéines recombinantes."

 

Merci d'avance 

Edited December 28, 2019 by cutieheartx

[cutieheartx]

Personne pour me répondre please ? 

[chloegrip]

Salut! Pour la transgénèse aléatoire je ne la retrouve pas dans mon cours est ce que ca ne te derangerait pas d'envoyer une photo ?

On utilise un promoteur T7 pour controler l'expression de la T7 qui permet d'obtenir GST quand on purifie les protéines obtenues dans des bactéries. Pour le promoteur de cytomégavirus il est très puissant et fonctionne pour les expériences de gènes eucaryotes, c'est lui qui controle la transcription du gène eucaryote d'interet.

La déphosphorylation est indispensable quand les extrémités générées par les endonucléases utilisées sont compatibles, si elles ne le sont pas il n'est pas obligatoirededéphosphoryler car leplasmide ne peut pas se refermer sur lui meme.

Pour la 4 je n'ai pas mon poly sur moi pour te répondre.

Pour la 5 je pense que c'est parce que CRISPRCAS9 permet la correction de gènes mutés en remplacant une séquence par une autre sans utiliser les cellules embryonnaires et tout alors que les nucléases a doigt de zinc ne réparent pas, (ne synthétisent pas d'ARN), elles se contentent de couper

 

Bonne journée

[cutieheartx]

Salut @chloegrip, c'est enfaites dans un concours où je suis tombé sur un item où il me demandait si tel modèle correspondait à de la transgénèse aléatoire, mais j'arrive pas à mettre de photos ici  est- ce que je peux te donner l'annale et le QCM correspondant ? 

 

et Okay merci pour tes réponses aux autres questions, je suis preneuse si tu as la réponse à ma question 4 mais déjà merci beaucoupp !! 

[chloegrip]

Oui j'ai récupéré mes polys tu as qu'a me dire de quelle annale il s'agit et j'essaierai de te répondre si je peux! Pour ta question 4 je ne sais pas non plus d'ouca sort maisje pense qu'il faut juste vérifier que ce serait potentiellement valide. En respectant le cadre de lecture donné dans l'énoncé tu vois que le fragment proposé contient un atg et pas de codon stop donc il peut tout a fait correspondre au clonage d'ADNc d'une partie de lac z entre ecoR1 et le stop sur le schéma.

 

[cutieheartx]

@chloegrip

Pour la transgénèse aléatoire, il s'agit du QCM 10 item A du concours 2016 

 

Et je suis désolée vraiment, mais je comprends toujours pas la question 4 (l'item C du QCM 1 de 2016), je m'emmêle les pinceaux entre l'ATG que je vois dans la séquence codante du gène lac z, celui en plein milieu de la séquence proposée dans l'item, le site d'EcoRI... je comprends vraiment pas dsl 

 

 

[chloegrip]

Le premier atg est celui présent à la base dans le bactériophage qui induit la traduction de lac z alors que celui de l'item C est celui qu'on a inséré au niveau du site ecoR1 et qui commence la traduction de la protéine LHS. On sait qu'on a obtenu une protéine de fusion donc les 2 atg doivent être en phase.

 

[cutieheartx]

Okayyy c'est bon j'ai compris merciii  @chloegrip (pour ta patience aussi haha, j'ai été longue à la détente) 

 

Et du coup t'as eu qqchose sur la transgénèse aléatoire ? 

Edited December 31, 2019 by cutieheartx